反式阿魏酸對大鼠離體冠狀動脈的舒張作用及機制探討.pdf

1、目的：
　　(1)觀察反式阿魏酸(trans-Ferulic acid,1~3 mmol/L)對離體大鼠冠狀動脈(rat coronary artery, RCA)靜息張力的影響。
　　(2)在離體RCA上，觀察反式阿魏酸對 KCl(60 mmol/L)、血栓素A2類似物U46619(1μmol/L)、內皮素-1( ET-1，0.01μmol/L)引起RCA收縮的抑制作用及舒張作用。
　　(3)通過觀察血管內皮、四種不

2、同的選擇性鉀通道阻斷劑(4-AP、Gli、BaCl2和TEA)、NOS抑制劑(L-NAME)、COX-2環(huán)氧合酶抑制劑(Indo)對反式阿魏酸舒張離體RCA的影響，并探討其作用機制。
　　(4)通過去鈣-復鈣的方法，探究反式阿魏酸舒張RCA與細胞外鈣內流和內鈣釋放的關系。
　　方法：
　　(1)離體RCA的制作方法：將SD雄性青年大鼠(200～250g)麻醉后立即斷頭、取出心臟，置于4℃、pH7.40、O2飽和的生理鹽

3、溶液(Physiological saline solution， PSS)中，并用若干大頭針固定。在解剖顯微鏡下迅速鈍性分離出冠狀動脈的室間隔支、室壁支和前降支，剪成長度約為2mm，內徑200~300μm的血管環(huán)，固定于微血管張力記錄儀(Multi Myograph System-610M, DMT)。采用PowerLab微血管環(huán)張力系統(tǒng)記錄不同濃度的反式阿魏酸(1,1.5,2,2.5,3 mmol/L)對離體RCA靜息張力的影響，以

4、KCl(60 mmol/L)所致離體RCA的最大收縮幅度為100％，計算加入上述濃度的反式阿魏酸后離體RCA靜息張力的變化。
　　(2)在DMT浴槽內加入KCl、U46619或ET-1，使其浴槽內終濃度分別為60 mmol/L、1μmol/L、0.01μmol/L，預收縮離體RCA。當收縮曲線再次回到基線時，向浴槽中加入終濃度為1,1.5,2 mmol/L的反式阿魏酸，預孵15~20 min,分別以加入反式阿魏酸前KCl(60 m

5、mol/L)、U46619(1μmol/L)或ET-1(0.01μmol/L)預收縮達到的最大收縮幅度為100%，計算加入上述濃度的反式阿魏酸后離體RCA的收縮百分比。
　　(3)用KCl(60 mmol/L)、U46619(1μmol/L)或ET-1(0.01μmol/L)預收縮離體RCA達到坪臺后，向內皮完整組和去內皮組分別累積加入反式阿魏酸(1,1.5,2,2.5,3 mmol/L)。以預收縮達到坪臺時的收縮幅度為100%，

6、計算加入上述濃度的反式阿魏酸后離體RCA的舒張百分比。
　　(4)當KCl(60 mmol/L)、U46619(1μmol/L)或ET-1(0.01μmol/L)預收縮離體RCA達到坪臺后，向浴槽中分別加入工具藥—鉀通道阻斷劑(TEA、Gli、BaCl2、4-AP)、NOS抑制劑(L-NAME)和COX-2環(huán)氧合酶抑制劑(Indo)，預孵15min后血管再次收縮達到坪臺，累積加入反式阿魏酸(1,1.5,2,2.5,3 mmol/L

7、)。以預收縮達到坪臺時的收縮幅度為100%，觀察加入工具藥后反式阿魏酸對離體RCA舒張作用的變化，并計算其舒張百分比。
　　(5) KCl(60 mmol/L)和U46619(1μmol/L)預收縮離體RCA達到坪臺后，采用去鈣-復鈣的實驗方法，以預收縮達到坪臺時的收縮幅度為100%，記錄預孵反式阿魏酸前后無鈣液中KCl(60 mmol/L)和U46619(1μmol/L)的收縮幅度以及復鈣(CaCl22.5 mmol/L)后的幅

8、度變化。
　　結果：
　　(1)在靜息狀態(tài)時，反式阿魏酸(1,1.5,2,2.5,3 mmol/L)對離體RCA張力無明顯影響。以KCl(60 mmol/L)所致離體RCA收縮的最大幅度為100%，隨著浴槽內反式阿魏酸濃度的不斷升高，血管環(huán)收縮百分比依次為(0.11±0.02)%、(0.14±0.09)%、(0.23±0.12)%、(0.37±0.15)%、(0.58±0.24)%，實驗組與溶劑對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義(

9、P>0.05)。
　　(2) KCl(60 mmol/L)、U46619(1μmol/L)、ET-1(0.01μmol/L)預收縮離體RCA，最大收縮幅度分別是(2.69±0.16) mN、(4.48±0.42) mN、(6.74±0.35) mN。當預孵反式阿魏酸的濃度為1.5 mmol/L時，KCl、U46619、ET-1組的收縮幅度與溶劑對照組相比無顯著性差異(P>0.05)；預孵濃度為2 mmol/L時，KCl、U4661

10、9、ET-1的最大收縮幅度分別降低了50.12%、43.38%和36.25%，與溶劑對照組相比，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；預孵濃度為2.5 mmol/L時，KCl、U46619、ET-1的最大收縮幅度分別降低了94.19%、95.97%和97.23%，與溶劑對照組相比，具有顯著性差異(P<0.05)。
　　(3)反式阿魏酸(1,1.5,2,2.5,3 mmol/L)能夠濃度依賴性地舒張內皮完整組和去內皮組離體RCA血管環(huán)

11、。在內皮完整組與去內皮組之間，反式阿魏酸的舒張作用無顯著性差異(P>0.05)。反式阿魏酸舒張KCl、U46619或ET-1預收縮的離體RCA，最大舒張率分別為(98.39±2.92)%；(95.03±2.86)%；(91.58±2.10)%。
　　(4)預孵TEA、Gli、BaCl2、L-NAME或Indo對反式阿魏酸引起的離體RCA舒張作用均無顯著性影響(P>0.05)；但是預孵4-AP能使KCl(60 mmol/L)、U46

12、619(1μmol/L)、ET-1(0.01μmol/L)預收縮離體RCA的最大舒張幅度分別降低了16.36%、20.46%和17.55%，與溶劑對照組相比，均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　(5)預孵反式阿魏酸(1，1.5，2 mmol/L)能夠明顯抑制KCl(60 mmol/L)在無鈣PSS液中復鈣后誘導的外鈣依賴性血管收縮，收縮率分別為(58.35±1.61)%、(32.90±1.63)%、(2.95±0.59)%；能

13、夠抑制U46619(1μmol/L)在無鈣PSS液中引起的一過性小幅度收縮(phasic收縮)以及復鈣后的收縮(tonic收縮)，收縮率分別為(69.35±1.52)%、(40.10±1.02)%、(6.74±0.36)%；(40.89±0.91)%、(13.74±0.43)%、(5.43±0.17)%。
　　結論：
　　(1)反式阿魏酸對靜息狀態(tài)的離體RCA無作用，但能夠抑制KCl(60 mmol/L)、U46619(1μ

14、mol/L)、ET-1(0.01μmol/L)引起的收縮作用。
　　(2)反式阿魏酸能夠濃度依賴性的舒張KCl(60 mmol/L)、U46619(1μmol/L)、ET-1(0.01μmol/L)預收縮的離體RCA，其RCA血管舒張作用與內皮的完整性無關，也與NO及PGI2合成途徑無關。
　　(3)反式阿魏酸對離體RCA的舒張作用可能與激活血管平滑肌細胞上KV通道、抑制細胞內鈣釋放和外 Ca2+內流有關，與KCa通道、KA