構建細粒棘球蚴熒光小鼠模型的方法學研究.pdf

1、目的：
　　1.嘗試細粒棘球蚴體外熒光染色，通過紅綠熒光信號強度分析不同藥物對原頭蚴活性的影響。
　　2.構建細粒棘球蚴小鼠活體內(nèi)熒光發(fā)光模型，并對小鼠肝臟中的細粒棘球蚴感染灶進行定位及量化分析。探討構建小鼠活體內(nèi)生物發(fā)光模型的可能性。
　　方法：
　　1.無菌分離提取原頭蚴，將原頭蚴分為對照組、二甲雙胍處理組（將10 mM二甲雙胍加入原頭蚴培養(yǎng)基中）、聯(lián)合用藥處理組（將10 mM二甲雙胍以及15μM阿苯達唑(相

2、當于4.2μg/mL)聯(lián)合加入原頭蚴培養(yǎng)基中）。培養(yǎng)并動態(tài)監(jiān)測原頭蚴活性。
　　2.采用JC-1熒光染料對不同處理組原頭蚴進行熒光染色，并置于共聚焦熒光顯微鏡下采集成像并記錄分析各組原頭蚴熒光強度。
　　3.將不同處理組的原頭蚴置于24孔板中，連續(xù)培養(yǎng)并采用小動物發(fā)光成像儀對三組原頭蚴熒光強度進行動態(tài)監(jiān)測，直至熒光信號消失。
　　4.將不同處理組的原頭蚴染色后種植于CF-1雄性小鼠肝臟被膜下，將不同注射組的小鼠置于小動

3、物發(fā)光成像儀中進行動態(tài)成像分析。選取對照組小鼠進行熒光梯度實驗，分析熒光信號衰減趨勢。
　　結果：
　　1.與對照組相比，Met藥物處理組原頭蚴活性出現(xiàn)一定程度的下降，ABZSO和Met藥物聯(lián)合使用組原頭蚴活性下降最為顯著。
　　2.對照組原頭蚴的紅色熒光強度明顯強于綠色熒光；Met藥物處理組原頭蚴紅色熒光強度與綠色熒光沒有顯著差異；ABZSO和Met藥物聯(lián)合使用組原頭蚴綠色熒光強度明顯強于紅色熒光。
　　3.三

4、組中原頭蚴的紅色熒光出現(xiàn)了明顯的下降趨勢，聯(lián)合用藥組的下降趨勢最為明顯，其次是二甲雙胍藥物處理組，對照組的下降趨勢較為平緩。而綠色熒光在聯(lián)合用藥組與二甲雙胍處理組中出現(xiàn)了明顯的增強趨勢，且聯(lián)合用藥組強于二甲雙胍組,隨后相應出現(xiàn)下降的趨勢。對照組的綠色熒光從檢測開始就處于較低水平，且有一定的下降趨勢，實驗組與對照組相比具有顯著的統(tǒng)計學差異（P<0.05）。
　　4.成功種植進小鼠肝臟后，對照組的紅色熒光區(qū)域明顯大于綠色熒光，且紅色熒

5、光強度強于綠色熒光,紅/綠熒光的強度比為4.1。二甲雙胍組的紅色熒光信號與綠色熒光相比，無論是熒光區(qū)域的大小還是熒光強度都沒有明顯的差異,且紅/綠比值為1.2。聯(lián)合用藥組的紅色熒光區(qū)域要小于綠色熒光，且紅色熒光強度也弱于綠色熒光，紅/綠比值為0.5。對照組小鼠肝區(qū)的紅色熒光在觀察初期強度較高，隨后逐漸的減弱。綠色熒光在種植后出現(xiàn)一定范圍內(nèi)的上升趨勢，隨后逐漸消褪。紅、綠熒光在36h檢測后，信號完全消失。
　　結論：
　　我們