乙型肝炎后肝硬化患者外周血單核細(xì)胞HLA-DR及TLR4的表達(dá)特點(diǎn)及臨床意義.pdf

1、自的：檢測(cè)乙型肝炎后肝硬化患者外周血單核細(xì)胞HLA-DR和TLR4表達(dá)特點(diǎn)及其與臨床特征、預(yù)后的關(guān)系，并初步探討其改變和發(fā)生機(jī)制；通過(guò)隨訪研究了解預(yù)防性應(yīng)用口服抗生素對(duì)單核細(xì)胞表型、亞群和HLA-DR及TLR4表達(dá)的影響，為我們進(jìn)一步了解肝炎后肝硬化形成機(jī)制及肝硬化患者預(yù)防性應(yīng)用抗生素的意義提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.外周血單核細(xì)胞表型的檢測(cè)：隨機(jī)選擇HBV所致的肝硬化患者54例，按Child-Pugh分為A級(jí)、B級(jí)

2、、C級(jí)，12例健康人作為對(duì)照組。采用三色熒光全血染色法，用熒光素標(biāo)記的抗CD14、抗CD16、抗HLA-DR、抗TLR4mAb進(jìn)行免疫熒光染色，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
　　2.血漿中LPS水平的檢測(cè)：采用鱟試劑盒檢測(cè)肝硬化患者及正常人血漿中的LPS水平。
　　3.研究對(duì)象血漿標(biāo)本取自白求恩國(guó)際和平醫(yī)院54例乙型肝炎病毒感染的住院患者和12例性別、年齡相匹配的健康志愿者。臨床指標(biāo)如ALT、AST、TBIL、ALB等用全自動(dòng)生化儀

3、檢測(cè)。患者的一般情況見(jiàn)表1。所有患者在過(guò)去6個(gè)月內(nèi)未接受過(guò)抗病毒藥物或類固醇類藥物治療。本研究符合世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言要求，并且獲得中國(guó)科學(xué)院生物研究所和白求恩國(guó)際和平醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。所有患者均已簽署知情同意書。
　　結(jié)果：
　　1.乙型肝炎后肝硬化患者外周血單核細(xì)胞頻率、表型及HLA-DR、TLR4的表達(dá)特點(diǎn)及與臨床指標(biāo)的關(guān)系
　　1.1 肝硬化患者外周血單核細(xì)胞的頻率表達(dá)特點(diǎn)：健康對(duì)照組、肝硬化Child

4、A級(jí)、Child B級(jí)、Child C級(jí)外周血中單核細(xì)胞的頻率分別為(6.78±2.47)％、(9.08±3.45)％、(12.93±2.05)％、(16.51±6.01)％，組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。肝硬化Child A級(jí)和B級(jí)單核細(xì)胞頻率與臨床指標(biāo)無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05)。肝硬化Child C級(jí)單核細(xì)胞頻率與AST和TBIL均呈顯著正相關(guān)(P＜0.05)。
　　1.2 肝硬化患者外周血CD16+單核細(xì)胞的頻率

5、表達(dá)特點(diǎn)：健康對(duì)照組、肝硬化Child A級(jí)、Child B級(jí)、Child C級(jí)外周血中CD16+單核細(xì)胞的頻率分別為(10.13±4.69)％、(12.63±5.07)％、(16.08±5.47)％、(23.86±8.11)％。其中，肝硬化Child A級(jí)、Child B級(jí)、Child C級(jí)三組組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，肝硬化Child B級(jí)、Child C級(jí)和健康對(duì)照組組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。肝硬化Chi

6、ld A級(jí)患者CD16+單核細(xì)胞頻率與ALT和AST呈正相關(guān)(P＜0.05)，肝硬化Child B級(jí)和Child C級(jí)患者CD16+單核細(xì)胞頻率與臨床指標(biāo)無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05)。
　　1.3 肝硬化患者外周血單核細(xì)胞HLA-DR的表達(dá)頻率特點(diǎn)：健康對(duì)照組、肝硬化Child A級(jí)、Child B級(jí)、Child C級(jí)外周血中單核細(xì)胞HBA-DR的表達(dá)頻率分別為(84.35±6.86)％、(88.90±6.24)％、(85.47±

7、7.54)％、(66.38±13.43)％。其中，肝硬化Child A、Child B和健康對(duì)照組三組組間比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，肝硬化Child C級(jí)單核細(xì)胞HBA-DR表達(dá)頻率與健康對(duì)照組、Child A、Child B三組的組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。肝硬化患者三組均與ALT、AST、TBIL無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)，Child A級(jí)患者HLA-DR與ALB呈顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.05)，而Child C級(jí)H

8、LA-DR與ALB呈正相關(guān)(P＜0.05)。
　　1.4 肝硬化患者外周血單核細(xì)胞TLR4平均熒光強(qiáng)度的表達(dá)特點(diǎn)：健康對(duì)照組、肝硬化Child A級(jí)、Child B級(jí)、Child C級(jí)外周血中單核細(xì)胞TLR4平均熒光強(qiáng)度的表達(dá)分別為(6.03±1.85)、(5.55±2.13)、(4.01±2.18)、(2.92±1.69)。其中，肝硬化Child B級(jí)和Child C級(jí)與Child A級(jí)、健康對(duì)照組組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.

9、05)。各組肝硬化患者單核細(xì)胞TLR4平均熒光強(qiáng)度的表達(dá)與臨床指標(biāo)均無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)。
　　2.肝硬化患者血漿中內(nèi)毒素的水平及與單核細(xì)胞HLA-DR和TLR4表達(dá)的關(guān)系健康對(duì)照組、肝硬化Child A級(jí)、Child B級(jí)、Child C級(jí)患者的血漿內(nèi)毒素水平分別為(3.70±2.15)pg/ml、(65.15±65.10)pg/ml、(143.37±149.16)pg/ml、(403.54±347.11)pg/ml，組間比

10、較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。肝硬化Child A、Child C級(jí)患者的血漿內(nèi)毒素水平與單核細(xì)胞HLA-DR、TLR4表達(dá)均無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05)，肝硬化Child B級(jí)患者的血漿內(nèi)毒素水平與單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05)，與TLR4呈顯著負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。
　　3.抗生素治療前后肝硬化患者外周血單核細(xì)胞頻率、表型及HLA-DR、TLR4的表達(dá)變化
　　3.1 抗生素治療前后肝硬化Ch

11、ild B級(jí)外周血單核細(xì)胞頻率分別為(12.49±1.56)％、(11.69±2.14)％，Child C級(jí)分別為(12.56±2.25)％、(13.01±1.52)％。其中，肝硬化Child B級(jí)和Child C級(jí)治療前后比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.2 抗生素治療前后肝硬化Child B級(jí)外周血CD16+單核細(xì)胞頻率分別為(14.76±5.61)％、(12.81±3.76)％，Child C級(jí)分別為(18.58

12、±6.50)％、(16.02±3.61)％。其中，肝硬化Child B級(jí)患者治療前后CD16+單核細(xì)胞比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，Child C級(jí)治療前后比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.3 抗生素治療前后肝硬化Child B級(jí)外周血單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)頻率分別為(85.78±7.19)％、(86.37±5.25)％，Child C級(jí)分別為(71.59±14.10)％、(78.40±11.27)％。其中，肝硬化

13、Child B級(jí)患者治療前后單核細(xì)胞HLA-DR表達(dá)頻率比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，Child C級(jí)患者治療前后比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.4 抗生素治療前后肝硬化Child B級(jí)外周血單核細(xì)胞TLR4平均熒光強(qiáng)度分別為(3.61±1.72)、(4.03±1.68)，Child C級(jí)分別為(4.66±1.48)、(4.93±1.03)。其中，肝硬化Child B級(jí)患者治療前后單核細(xì)胞TLR4平均熒光強(qiáng)度比較有

14、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，Child C級(jí)治療前后比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.乙型肝炎后肝硬化患者外周血單核細(xì)胞及CD16+單核細(xì)胞亞群頻率增加，HLA-DR在疾病早期呈上升趨勢(shì)，晚期則明顯下降，TLR4表達(dá)隨病情進(jìn)展持續(xù)性下降，其變化與病情嚴(yán)重程度和預(yù)后相關(guān)，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)對(duì)肝硬化的病情和預(yù)后評(píng)價(jià)具有重要意義。
　　2.口服抗生素治療后通過(guò)降低體內(nèi)內(nèi)毒素水平能降低CD16+單核細(xì)胞頻率、上調(diào)單