HFHG5基因的功能研究.pdf

1、據(jù)世界衛(wèi)生組織最新統(tǒng)計，心臟病以12.9％致死率位居疾病的首位。該疾病已成為科學家們急待解決的世界性難題。已知心臟病的早期癥狀可表現(xiàn)為病理性心肌肥大。因此，從分子學水平上系統(tǒng)地研究心肌肥大的調(diào)控機制，將為治愈心臟病提供理論指導。
　　已有研究表明，在小鼠模型（主動脈捆扎法）及病人組織樣本中HFHG5的表達均上調(diào)，這暗示了心肌肥厚的發(fā)生可能與HFHG5相關。本實驗室通過熒光素報告系統(tǒng)分析及CO-IP實驗發(fā)現(xiàn)，HFHG5與Smad3/

2、4存在相互作用，這暗示了HFHG5很可能通過TGF-β/Smads信號途徑進行調(diào)控心肌肥大的發(fā)生，但其機制尚未被研究。接下來的研究就此展開。
　　為了研究FHG5基因調(diào)控心肌肥大發(fā)生的機制，本文開展了下述研究:
　　(1)構建了重組腺病毒載體pAd-HFHG5并制備了腺病毒，經(jīng)驗證腺病毒AdHFHG5構建成功。AdHFHG5主要用于新生大鼠原代心肌細胞中過表達FHG5的實驗。同時，成功構建了干擾載體pSuper-HFHG5-

3、shRNA及驗證了實驗室已有的過表達載體pCMV-Myc-h-HFHG5，這一對載體主要用于體外干擾和過表達FHG5的細胞實驗。
　　(2)利用PE及FBS分別刺激新生大鼠原代心肌細胞（AdGFP組及AdHFHG5組），檢測到HFHG5表達在肥大刺激后均會發(fā)生上調(diào)，這表明HFHG5與心肌肥大相關。
　　(3)通過免疫熒光實驗研究HFHG5與Smad4的定位情況，發(fā)現(xiàn)HFHG5在細胞質和細胞核中均有表達，且在細胞質中與Smad

4、4存在共定位。
　　(4) Western blot實驗發(fā)現(xiàn)，過表達HFHG5促進了Smad4入核，而干擾HFHG5會抑制Smad4入核，這證明了HFHG5通過促進Smad4的入核，參與TGF-β/Smads信號途徑的調(diào)控。
　　(5)初步研究了HFHG5與Smad4協(xié)同入核后的下游調(diào)控機制。RT-PCR實驗證明HFHG5與Smad4協(xié)同入核后可以激活下游肥大相關基因的表達，表明HFHG5促進心肌肥大發(fā)生的分子機制主要是HF