斑馬魚尾鰭再生中相關(guān)基因的表達及血根堿對其再生過程的影響.pdf

1、單位代碼10476學號1504183004。分類號Q38IIllUIIIIIIIIIIIIII』一丫3437051河南衙軸大穿河南衙軸大學碩士學位論文斑馬魚尾鰭再生中相關(guān)基因的表達及血根堿對其再生過程。，的影晌，學科、專業(yè)研究方向申請學位類別申請人指導教師：生物學遺傳學：動物分子遺一傳學I理學碩士，：資靜雅’一：李莉副教授二。一八年五月摘要再生，即發(fā)育成熟的個體，受到機械或自然傷害后的組織，仍然存在在原有基礎(chǔ)上發(fā)育成完整個體的能力。與哺

2、乳動物相反的是，硬骨魚魚鰭組織在剪鰭后具有很強的再生潛能，其尾鰭再生過程是研究組織再生分子基礎(chǔ)的一個重要模型。最近，斑馬魚作為組織或器官遺傳學研究的模式脊椎動物而出現(xiàn)，對傷害的反應(yīng)，斑馬魚主要的鰭結(jié)構(gòu)再生的非?？?，在剪鰭或損傷后，由各種再生相關(guān)基因表達引起級聯(lián)反應(yīng)，使得丟失尾鰭結(jié)構(gòu)仍然能夠恢復(fù)到原來的大小。因為基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)與細胞外基質(zhì)(extracellularmatrix

3、，ECM)的降解和重塑有關(guān)，能夠影響細胞遷移，是細胞外基質(zhì)在健康、疾病、發(fā)育、再生過程中周轉(zhuǎn)的關(guān)鍵酶。所以，我們又對romp9和rompl3這兩個基因進行生物信息學分析，在NCBIGeneBank中，查找到mmp9cDNA序列全長2801bp，其中102bp的57UTR區(qū)和656bp的37UTR區(qū)，ORF長2043bp，編碼680個氨基酸序列，相對分子質(zhì)量是7658927Da，等電點pI為563。對蛋白的二級結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)0l螺旋有145

4、個，占2132％，B轉(zhuǎn)角有77個，占1132％，無規(guī)則卷曲線圈有309個，占4544％mmpl3cDNA序列全長1653bp。其中12bp的57UTR區(qū)和213bp的37UTR區(qū)，ORF長1428bp，編碼475個氨基酸序列。相對分子質(zhì)量是5379201Da，等電點pI是597，對蛋白的二級結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)0l螺旋111個，占2337％，B轉(zhuǎn)角44個，占926％，無規(guī)則卷曲線圈有199個，古4189％。對mmp9和mmpl3基因進行qPCR

5、，發(fā)現(xiàn)在剪鰭后，這兩個基因表達量都顯著性增加。運用原位雜交技術(shù)，對再生不同時期的斑馬魚尾鰭做冰凍切片，采用預(yù)先制備好的romp9和mmpl3基因正義和反義RNA探針進行雜交，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：再生斑馬魚尾鰭中，romp9在剪鰭后再生第3天(3dpa)在骨骼前體細胞中表達，mmpl3在3dpa芽基中表達信號最強，4dpa時，表達信號減弱。另外，在GeneBank中查找另外13個再生相關(guān)基因的cDNA全長序列，根據(jù)全長序列設(shè)計熒光定量PCR特異引物