DFMG調(diào)節(jié)TLR4信號(hào)通路對(duì)氧化損傷的內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞活化和遷移的影響.pdf

1、第一部分 LPC損傷的HUVE-12細(xì)胞對(duì)MΦ增殖、遷移及形成泡沫細(xì)胞的影響
　　目的:
　　研究溶血磷脂酰膽堿(lyso-Phosphatidylcholine，LPC)能否損傷人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系細(xì)胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVE-12)，對(duì)人單核細(xì)胞(human acute monocytic leukemia cellline，THP-1)源性巨噬細(xì)胞(macr

2、ophages，MΦ)增殖、遷移、形成泡沫細(xì)胞的影響。
　　方法:
　　1、用LPC誘導(dǎo)氧化損傷HUVE-12，制備氧化應(yīng)激損傷內(nèi)皮細(xì)胞模型;用Transwell制備氧化應(yīng)激損傷的HUVE-12與THP-1源性MΦ共培養(yǎng)的模型。
　　2、用MTT法、劃痕實(shí)驗(yàn)法、油紅O染色法和總膽固醇含量測(cè)定分別檢測(cè)損傷的HUVE-12對(duì)THP-1源性MΦ增殖、遷移形成泡沫細(xì)胞的影響，Western Blot檢測(cè)HUVE-12細(xì)胞TLR

3、4、Myd88、NF-kBp65蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　隨著LPC濃度增加，HUVE-12活性氧的產(chǎn)生、LDH的含量都增加，LPC損傷HUVE-12上調(diào)共培養(yǎng)系統(tǒng)中HUVE-12細(xì)胞TLR4、Myd88、NF-kBp65表達(dá)和共培養(yǎng)條件培養(yǎng)基IL-1β的含量，促進(jìn)共培養(yǎng)系統(tǒng)中MΦ增殖、遷移、形成泡沫細(xì)胞。
　　第二部分 DFMG干預(yù)LPC損傷HUVE-12細(xì)胞對(duì)MΦ增殖、遷移及形成泡沫細(xì)胞的影響
　　目

4、的:
　　研究活性新化學(xué)實(shí)體，7-二氟甲氧基-5，4'-二甲氧基金雀異黃素（7-difluoromethoxy-5，4'-dimethoxygenistein，DFMG）是否抑制LPC氧化損傷HUVE-12細(xì)胞對(duì)THP-1源性MΦ增殖、遷移及形成泡沫細(xì)胞的促進(jìn)作用。
　　方法:
　　用MTT法、劃痕實(shí)驗(yàn)、油紅O染色法和總膽固醇含量測(cè)定檢測(cè)濃度梯度DFMG對(duì)LPC損傷HUVE-12誘導(dǎo)THP-1源性MΦ增殖、遷移、形成泡

5、沫細(xì)胞的影響，Western Blot檢測(cè)HUVE-12細(xì)胞TLR4、Myd88、NF-kBp65蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　DFMG降低共培養(yǎng)條件培養(yǎng)基的IL-1β含量以及下調(diào)共培養(yǎng)系統(tǒng)中HUVE-12細(xì)胞TLR4、Myd88、NF-kBp65蛋白表達(dá)，抑制共培養(yǎng)系統(tǒng)中THP-1源性MΦ增殖、遷移、形成泡沫細(xì)胞。
　　第三部分 DFMG調(diào)節(jié)TLR4信號(hào)通路對(duì)LPC損傷HUVE-12細(xì)胞誘導(dǎo)MΦ增殖、遷移及形成泡

6、沫細(xì)胞的影響
　　目的:
　　研究DFMG抑制氧化損傷的HUVE-12促進(jìn)THP-1源性MΦ增殖、遷移、形成泡沫細(xì)胞的作用是否涉及調(diào)控HUVE-12細(xì)胞的TLR4信號(hào)通路。
　　方法:
　　用MTT法、劃痕實(shí)驗(yàn)、油紅O染色法和總膽固醇含量測(cè)定檢測(cè)TLR4特異性拮抗劑(CLI-095)、TLR4特異性激動(dòng)劑（Lipopolysaccharides，LPS）、白介素-1受體特異性拮抗劑（Interleukin-1 r

7、eceptor antagonist，IL-1Ra）和DFMG對(duì)LPC損傷HUVE-12誘導(dǎo)THP-1源性MΦ增殖、遷移、形成泡沫細(xì)胞，western blot檢測(cè)HUVE-12細(xì)胞TLR4、Myd88、NF-kBp65蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　CLI-095、IL-1Ra、DFMG均能降低共培養(yǎng)條件培養(yǎng)基的IL-1β含量和下調(diào)共培養(yǎng)系統(tǒng)中HUVE-12細(xì)胞TLR4、Myd88、NF-kBp65蛋白的表達(dá)，抑制共培養(yǎng)

8、系統(tǒng)中THP-1源性MΦ增殖、遷移、形成泡沫細(xì)胞。LPS增加共培養(yǎng)條件培養(yǎng)基的IL-1β含量和上調(diào)共培養(yǎng)系統(tǒng)中HUVE-12細(xì)胞TLR4、Myd88、NF-kBp65蛋白的表達(dá)，促進(jìn)共培養(yǎng)系統(tǒng)中THP-1源性MΦ增殖、遷移、形成泡沫細(xì)胞。
　　結(jié)論:
　　1.在transwell共培養(yǎng)基系統(tǒng)中，LPC損傷HUVE-12促進(jìn)MΦ增殖、遷移、形成泡沫細(xì)胞。
　　2.DFMG抑制LPC損傷HUVE-12促進(jìn)MΦ增殖、遷移、形