三疣梭子蟹乳化病病理及藥物篩選研究.pdf

1、三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）是我國主要的海水養(yǎng)殖品種之一。近年來，隨著梭子蟹養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大， 各種病害也開始接踵而至，并呈現(xiàn)出大規(guī)模暴發(fā)和大面積流行的趨勢?！叭榛　笔墙晡：λ笞有佛B(yǎng)殖最為嚴重的疾病之一，在部分病發(fā)密集地區(qū)發(fā)病情況相當嚴重，造成大批養(yǎng)殖成蟹死亡，經(jīng)濟損失巨大。本研究對其發(fā)病癥狀、生化病理、組織病理、超微病理等進行了研究分析，并開展防治藥物初步篩選及藥理研究工作，旨在為三疣梭子蟹“乳

2、化病”的病理研究及防治工作提供科學依據(jù)。本研究主要結(jié)果如下： 1.研究三疣梭子蟹患乳化病后主要病變組織中保護酶系統(tǒng)的病理變化。以患病三疣梭子蟹的肝胰腺、鰓、心肌及步足肌組織為材料，研究四種組織中淀粉酶(AMS)、超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、溶菌酶(Lysozyme)、過氧化氫酶(CAT)、堿性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST/GOT)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT/GPT)9種酶活力的變化。結(jié)果表

3、明: 病變后梭子蟹四種組織中9種酶活力指標均存在不同程度的病理變化，表明這9種酶的活力指標可以作為乳化病病理分析的重要參考依據(jù)。 2. 應用凝膠電泳技術(shù)（PAGE），研究健康三疣梭子蟹5種組織中10種同工酶以及肌漿蛋白的酶譜表達情況，對健康三疣梭子蟹養(yǎng)殖群體進行生化遺傳分析。并對患有乳化病的三疣梭子蟹3種組織中10種同工酶及肌漿蛋白的酶譜表型進行分析，對患病后酶譜變化特征及原因進行研究。結(jié)果顯示：在對40只健康梭子蟹所檢測的10

4、種同工酶的25個基因座位中，ADH 、ACP-1、CAT-2、EST-2、FDH-2和SOD共6個基因座位為多態(tài)，其多態(tài)座位比例（P）為24 ﹪，平均雜合度期望值（H）為0.1066。同時在CAT、LDH、ACP、FDH 4種酶及肌漿蛋白(Pm)中表現(xiàn)出顯著的組織特異性。病理研究則證實：除SOD酶外，其它9種同工酶以及肌漿蛋白的條帶均出現(xiàn)明顯的紊亂現(xiàn)象。表明酶譜的特異性變化可以作為乳化病早期診斷及病理分析的生化輔助指標。 3.

5、利用組織切片技術(shù)對患乳化病三疣梭子蟹的鰓、肝胰腺、步足肌肉、心肌和性腺5種組織進行病理研究。結(jié)果顯示：患乳化病梭子蟹的組織病變性質(zhì)為變質(zhì)性炎癥，主要病變部位在肝胰腺組織，病灶表現(xiàn)為水樣變性、脂肪變性和細胞壞死等癥狀，步足肌和心肌組織表現(xiàn)出肌纖維斷裂、渾濁等癥狀。 4. 利用超薄切片技術(shù)對患乳化病梭子蟹的鰓、肝胰腺、步足肌肉、心肌和性腺5種組織進行超微結(jié)構(gòu)病理研究。結(jié)果顯示：在肝胰腺和步足肌組織中有大量細菌。肝胰腺細胞結(jié)構(gòu)損傷最為

6、嚴重，主要表現(xiàn)為微絨毛損傷脫落、線粒體壞死、溶酶體增多及脂肪變性，肌細胞損傷主要表現(xiàn)為肌纖維斷裂、溶解，血隙中血淋巴細胞受致病菌嚴重侵染。初步分析乳化病致病機理并提出防治意見。 5.參照美國國家臨床實驗標準化委員會（NCCLS）提出的標準（M27-A方案），采用棋盤微量稀釋法，對分離自患乳化病梭子蟹的致病菌溶藻弧菌，進行中草藥與化學藥劑聯(lián)用的體外聯(lián)合藥敏實驗。選擇五倍子、地榆、石榴皮以及復方新諾敏、磺胺+TMP、慶大霉素作為聯(lián)合

7、用藥藥物， 結(jié)果發(fā)現(xiàn)聯(lián)合用藥時各藥物的MIC（最小抑菌濃度）值比單獨使用時有顯著降低，具有統(tǒng)計學意義（P< 0.05），其中以五倍子和慶大霉素的協(xié)同作用最為顯著。 6. 采用ATB FUNGUS試劑盒與中草藥紙片法抑菌實驗，對分離自患乳化病梭子蟹的病原真菌葡萄牙假絲酵母菌進行藥敏實驗，為乳化病防治工作提供參考依據(jù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)葡萄牙假絲酵母菌對氟胞嘧啶、兩性霉素B、制霉菌素、咪康唑、益康唑以及酮康唑六種化學試劑作用敏感。吳茱萸、藁木