針對(duì)胰腺星狀細(xì)胞的非病毒基因輸送用于胰腺癌的治療.pdf

1、胰腺癌的致死率極高，患者五年生存率不足8％。富含基質(zhì)(stroma)是胰腺癌腫瘤微環(huán)境的顯著特點(diǎn)，這些基質(zhì)主要由成纖細(xì)胞及分泌的膠原等組成。激活態(tài)的胰腺星狀細(xì)胞，即胰腺癌相關(guān)成纖細(xì)胞不但作為胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移及耐藥的幫兇，而且阻礙了治療藥物向腫瘤內(nèi)部及腫瘤細(xì)胞的滲透，增加了治療的難度。此外，近年來(lái)研究表明除去或過(guò)多殺傷胰腺星狀細(xì)胞會(huì)引起免疫抑制效應(yīng)，加速腫瘤的轉(zhuǎn)移。因此在治療胰腺癌的過(guò)程中，選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞，不影響胰腺星狀細(xì)胞的存活

2、是非常重要的。
　　基因輸送是指利用載體(病毒載體或非病毒載體)包載目的基因?qū)⑵漭斔偷桨屑?xì)胞或組織的技術(shù)，將基因輸送到靶點(diǎn)部位是實(shí)現(xiàn)有效治療的前提。非病毒基因輸送因安全性好，已成為腫瘤治療研究的熱點(diǎn)。然而，相對(duì)于病毒載體，非病毒載體基因轉(zhuǎn)染效率較低，且具有很強(qiáng)的細(xì)胞株依賴性。TRAIL(TNF-related apoptosis-inducing ligand，腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體)作為T(mén)NF超家族的一員，能夠選擇性的引起

3、腫瘤細(xì)胞的凋亡而對(duì)大多數(shù)種類的正常細(xì)胞沒(méi)有殺傷作用，并且具有旁觀者效應(yīng)(對(duì)周圍細(xì)胞具有輻射殺傷能力)。針對(duì)胰腺癌微環(huán)境的特點(diǎn)，提出將TRAIL基因輸送到易于到達(dá)的胰腺星狀細(xì)胞，表達(dá)出trail蛋白殺死臨近的腫瘤細(xì)胞而對(duì)胰腺星狀細(xì)胞本身沒(méi)有傷害，探討非病毒基因治療在胰腺癌治療中的新思路。
　　實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)多種非病毒載體在胰腺癌細(xì)胞上轉(zhuǎn)染效率很低，但分枝狀聚乙烯亞胺(BPEI，25KDa)能夠高效轉(zhuǎn)染胰腺星狀細(xì)胞。將胰腺星狀細(xì)胞和胰腺癌細(xì)

4、胞共培養(yǎng)后分別轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白(GFP)質(zhì)粒和紅色熒光蛋白(RFP)質(zhì)粒，發(fā)現(xiàn)BPEI仍具有選擇性高轉(zhuǎn)染胰腺星狀細(xì)胞的特點(diǎn)。在轉(zhuǎn)染報(bào)告基因與治療基因融合質(zhì)粒pEGFP-TRAIL實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)胰腺星狀細(xì)胞高效表達(dá)了GFP且生長(zhǎng)正常，而其周圍的腫瘤細(xì)胞PI染色呈陽(yáng)性，說(shuō)明pEGFP-TRAIL被成功的轉(zhuǎn)染到胰腺星狀細(xì)胞中，而表達(dá)出的trail蛋白引起了周圍腫瘤細(xì)胞的死亡。在進(jìn)行體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)時(shí)，將胰腺癌細(xì)胞和胰腺星狀細(xì)胞同時(shí)接種到胰腺尾部，建

5、立了含有成纖細(xì)胞的胰腺癌原位模型來(lái)評(píng)價(jià)體內(nèi)的抗腫瘤效果。為了降低載體的毒性，將帶有負(fù)電荷的γ-PGA(γ-聚谷氨酸，一種天然產(chǎn)物)包裹在BPEI/DNA復(fù)合物的外層，不僅降低了系統(tǒng)毒性還進(jìn)一步提高了治療效果。
　　綜上所述，針對(duì)胰腺癌微環(huán)境富含成纖維細(xì)胞的特點(diǎn)，采用非病毒基因輸送載體，選擇性轉(zhuǎn)染胰腺星狀細(xì)胞。利用trail蛋白的選擇性殺傷和旁觀者效應(yīng)，trail蛋白在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)對(duì)成纖維細(xì)胞毒性很小。這一治療策略不僅可以克服