蕨麻活性成分野薔薇苷含量測定及其在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué).pdf

1、目的：本文以蕨麻為研究對象，建立用于測定蕨麻藥材中野薔薇苷和刺梨苷含量的HPLC-ELSD測定方法，并對野薔薇苷在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)性質(zhì)進(jìn)行初步研究。
　　方法：
　　1.利用 D101型大孔吸附樹脂對蕨麻醇提物的30％乙醇溶液進(jìn)行分段，依次用蒸餾水、30%乙醇、70%乙醇、95%乙醇作為流動相洗脫，分別得到水餾分、30%乙醇餾分、70%乙醇餾分和95%乙醇餾分。利用開放硅膠色譜柱、ODS反相色譜及制備型RP-HPLC，對

2、70%乙醇餾分中的化合物進(jìn)行分離純化和分析，為藥代動力學(xué)實(shí)驗(yàn)所需的野薔薇苷積累原料。
　　2.建立蕨麻藥材中野薔薇苷和刺梨苷含量的RP-HPCL-ELSD檢測方法，并對其進(jìn)行方法學(xué)確證。采用該方法測定購自青海西寧、青海玉樹、云南大理、云南楚雄、西藏那曲、四川康定、甘肅甘南等地的不同品級共12個蕨麻樣品中野薔薇苷和刺梨苷的含量。
　　3.建立大鼠血漿中野薔薇苷含量SPE-HPLC-ESI-MS測定方法，并進(jìn)行方法學(xué)確證。采用該

3、方法對大鼠口服野薔薇苷后血漿藥物濃度變化進(jìn)行檢測和初步藥代動力學(xué)擬合。
　　結(jié)果：
　　1.本實(shí)驗(yàn)采用 D101大孔樹脂對蕨麻醇提物的30%乙醇溶液進(jìn)行分段，繼而利用開放硅膠色譜柱、ODS反向色譜及制備型RP-HPLC對70%乙醇餾分中的化合物進(jìn)行分離純化，快速分離得到并積累了野薔薇苷(純度>98%,產(chǎn)率0.33‰)、刺梨苷(純度>95%,產(chǎn)率0.16‰)、薔薇酸(純度>95%,產(chǎn)率0.014‰)和委陵菜酸(純度>95%,產(chǎn)

4、率0.10‰)四種三萜類化合物。
　　2.本實(shí)驗(yàn)使用 HPLC-ELSD建立了用于測定蕨麻藥材中野薔薇苷和刺梨苷含量的分析方法，野薔薇苷和刺梨苷的線性范圍分別為34.80~754.00μg/ml和34.23~741.65μg/ml，r2分別為0.9981和0.9992，線性關(guān)系良好。日內(nèi)日間精密度(野薔薇苷<2.36%，刺梨苷<6.12%，RSD%)，加樣回收率(野薔薇苷97.57%，刺梨苷99.16%)，穩(wěn)定性(野薔薇苷<1.2

5、4%，刺梨苷<3.40%，RSD%)均符合GPH5-1《化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則》的規(guī)定，并運(yùn)用該方法測定了12個蕨麻樣品中的野薔薇苷和刺梨苷含量。
　　3.本實(shí)驗(yàn)建立了測定大鼠血漿內(nèi)野薔薇苷含量的SPE-HPLC-ESI-MS方法，該方法線性范圍5~500 ng/ml，標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)r2=0.9990，線性關(guān)系良好，日內(nèi)日間精密度RSD<7.69%，準(zhǔn)確度RE<5.34%，穩(wěn)定性 RE<13.41%，回收率(L

6、QC91.0±10.3%, MQC87.7±5.1%, HQC84.0±4.5%, and IS85.4±4.4%)和基質(zhì)效應(yīng)(LQC111.9±7.4%, MQC88.9±2.9%, HQC88.9±2.1%, and IS101.4±3.8%)符合EMEA關(guān)于生物樣品分析方法學(xué)驗(yàn)證的指導(dǎo)原則的規(guī)定。采用該方法測定了口服給藥后大鼠血漿內(nèi)野薔薇苷的藥時曲線。結(jié)果顯示，野薔薇苷進(jìn)入大鼠體內(nèi)后，吸收迅速，達(dá)峰時間為0.2 h，口服劑量為60

7、mg/kg時，最大血藥濃度僅為332.81 ng/ml。半衰期為7.97 h，在大約4 h處出現(xiàn)雙峰現(xiàn)象。
　　結(jié)論：
　　1.本研究建立的 HPLC-ELSD法測定蕨麻藥材中的野薔薇苷和刺梨苷含量的方法簡單、準(zhǔn)確高效。蕨麻中野薔薇苷和刺梨苷的含量與產(chǎn)地的平均海拔高度和產(chǎn)品的品級高低有關(guān)。產(chǎn)自青藏高原各產(chǎn)地的蕨麻中野薔薇苷和刺梨苷的含量比其他產(chǎn)地的蕨麻高；相同產(chǎn)地的不同品級蕨麻，品級越低者，野薔薇苷和刺梨苷的含量越高。