RNA干擾AE2基因表達在高糖誘導內(nèi)皮細胞凋亡中的作用.pdf

1、目的:研究人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)轉染AE2shRNA后在高糖誘導內(nèi)皮細胞凋亡中的作用。
　　 方法:將人臍靜脈內(nèi)皮細胞株CRL-2480,均勻接種在六孔培養(yǎng)板上,隨機分為四個組:未轉染正常對照(Control)組、高糖(HG)組、轉染非特異shRNA(陰性對照組,Non—silencing shRNA)組、轉染AE2 shRNA(RNAi)組。除Control組外,其余各組在轉染后,用含35.6mM葡萄糖的DMEM繼續(xù)

2、培養(yǎng)48h,然后檢測以下指標:①細胞存活率；②HUVECs中AE2 mRNA的表達；③HUVECs中AE2蛋白的表達:④細胞凋亡的程度；⑤細胞內(nèi)活性氧(ROS)的含量；⑥細胞中Caspase-3活性；⑦HUVECs中線粒體膜電位變化；⑧細胞內(nèi)NO水平。
　　 結果:HUVECs用高糖培養(yǎng)48h后,細胞存活率明顯下降,AE2 mRNA和蛋白表達水平升高,與Control組相比具有顯著性差異(P<0.01)；Caspase-3激活增

3、多,ROS含量增加,NO水平和線粒體膜電位下降,細胞明顯凋亡,與Control組比較具有顯著性差異(P<0.05)。HUVECs先轉入AE2 shRNA干擾質(zhì)粒,再用高糖培養(yǎng)液培養(yǎng)48h后,細胞的存活率較單純用高糖培養(yǎng)液培養(yǎng)的內(nèi)皮細胞明顯上升,AE2 mRNA和蛋白表達水平也相應地明顯下降,與高糖組比較具有顯著性差異(P<0.01):Caspase-3激活明顯減少,NO下降不明顯,ROS含量降低,線粒體膜電位升高,細胞凋亡明顯減輕,與高

4、糖組比較具有顯著性差異(P<0.05)。而轉入非特異shRNA用高糖培養(yǎng)液培養(yǎng)48h后,以上所對應的指標并沒有發(fā)生顯著性變化,與高糖組比較沒有統(tǒng)計學差異(P>0.05)。以上結果表明實驗成功地將AE2基因特異性沉默后,有效地降低了高糖所致ROS的生成,并且阻止了線粒體膜電位的下降及Caspase-3的激活,明顯防止了高糖誘導內(nèi)皮細胞的損傷和凋亡。
　　 結論:AE2可介導高糖誘導內(nèi)皮細胞損傷或/和凋亡,其機制可能與ROS/mPT