E2F2誘導(dǎo)對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖及其不良預(yù)后的相關(guān)性研究.pdf

1、非小細(xì)胞肺癌是全球最常見(jiàn)的癌癥之一，在美國(guó)和中國(guó)，肺癌都是致死率最高的癌癥。E2F轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子參與了大量的生命活動(dòng)，包括細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡以及DNA損傷應(yīng)答。本研究對(duì)E2F2是否參與非小細(xì)胞肺癌生長(zhǎng)、增殖，及其與非小細(xì)胞肺癌預(yù)后的關(guān)系，HPV感染與NSCLC中E2F2、Survivin蛋白表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行了探討。
　　方法：
　　1、采集86例經(jīng)病理或細(xì)胞學(xué)確診的非小細(xì)胞肺癌患者的組織通過(guò)免疫組化的方式分析E2F2蛋白的表達(dá)

2、水平，并統(tǒng)計(jì)分析E2F2與臨床特征和不良預(yù)后的相關(guān)性。對(duì)其中8對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者手術(shù)切除后肺癌組織及癌旁組織，通過(guò)運(yùn)用Western Blot方法檢測(cè)肺癌組織及癌旁組織研究E2F2在細(xì)胞中表達(dá)的量。
　　2、構(gòu)建E2F2 shRNA和雜序shRNA，以慢病毒轉(zhuǎn)染H1299和A549非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系，用 MTT、免疫組化和菌落形成實(shí)驗(yàn)來(lái)研究轉(zhuǎn)染后 E2F2表達(dá)的改變，以及E2F2對(duì)細(xì)胞增殖和生長(zhǎng)的影響。
　　3、選取86例非

3、小細(xì)胞肺癌和26例良性病變肺組織，每例標(biāo)本均分成兩組：一組應(yīng)用PCR的方式用人乳頭狀瘤病毒（HPV）的16E6和18E7這兩種物質(zhì)進(jìn)行特異性的引物來(lái)探究上述組織中是否有對(duì)應(yīng)的物質(zhì)存在；另一組用免疫組化的方式檢測(cè)E2F2和Survivin蛋白在良性組織中和非小細(xì)胞肺癌的表達(dá)情況，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)的方法來(lái)分析其數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果：
　　1.通過(guò)免疫組化的方式分析了86例非小細(xì)胞肺癌的結(jié)果表明，86例組織中，有54例E2F2的表達(dá)量相比癌

4、旁正常的組織有顯著性的提高。用western blot檢測(cè)了對(duì)其中8對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者的癌組織及其癌旁組織，結(jié)果表明在8組中，有5組的結(jié)果顯示 E2F2的表達(dá)量在癌組織中要顯著的高于癌旁正常組織。， western blot結(jié)果在8對(duì)非小細(xì)胞肺癌癌組織及癌旁正常組織中，有5組的結(jié)果顯示E2F2的表達(dá)量在癌組織中要顯著的高于癌旁正常組織。
　　2.進(jìn)一步的研究表明E2F2的表達(dá)量與臨床分期和腫瘤大小存在這一定的關(guān)系。此外，Kapla

5、n-Meier分析表明高的高表達(dá)與總生存期顯著性相關(guān)，但是與無(wú)病生存期不相關(guān)。
　　3.結(jié)果顯示抑制E2F2的表達(dá)能夠降低非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的活性以及集落形成的能力。
　　4.非小細(xì)胞肺癌組中HPV16和18型DNA檢出率為43.00％（37/86），對(duì)于良性肺病組的7.69%（2/26）發(fā)生的明顯的偏高，兩者間存著顯著性差異。
　　5. E2F2蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)率62.80%（54/86），對(duì)比肺良性病變

6、組的23.08%（6/26），表達(dá)率要明顯的偏高，兩者間也存在著顯著性差異。其中E2F2陽(yáng)性表達(dá)中的高表達(dá)率為64.81%（35/54）。且Survivin蛋白在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)的陽(yáng)性率為61.63%（53/86），Survivin蛋白的表達(dá)在肺良性病變組中沒(méi)有檢測(cè)到。
　　6.在86例非小細(xì)胞肺癌中，E2F2和Survivin的陽(yáng)性表達(dá)數(shù)分別為54和53例，其中兩者均陽(yáng)性表達(dá)的數(shù)目為33例，兩者均為陰性表達(dá)的例數(shù)為17例，通過(guò)

7、計(jì)數(shù)資料的相關(guān)分析得出在非小細(xì)胞肺癌中這兩者的表達(dá)量呈正相關(guān)。
　　7.E2F2和Survivin蛋白在非小細(xì)胞肺癌中HPV陽(yáng)性組中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為86.50%（32/37）、78.40%（29/37），均高于HPV陰性組中的38.8%（19/49）、49.0%（24/49），兩者間存在著顯著性差異。
　　結(jié)論：
　　本實(shí)驗(yàn)顯示E2F2高表達(dá)者有較低的總生存，提示E2F2可能是肺癌預(yù)后不良因素之一。單變量多變量分析結(jié)