穿心蓮內(nèi)酯對大鼠肝微粒體CYP450酶活性的體內(nèi)外影響研究.pdf

1、目的：⑴分別建立檢測大鼠肝微粒體中甲苯磺丁脲、奧美拉唑、非那西丁、咪達唑侖和美托洛爾原型及代謝產(chǎn)物的高效液相色譜方法，評價大鼠肝微粒體中CYP2C9、CYP2C19、CYP1A2、CYP3A4和CYP2D6酶的活性，研究穿心蓮內(nèi)酯對肝微粒體中CYP450五個亞型酶活性的體外影響。⑵建立同時檢測大鼠血漿中甲苯磺丁脲、奧美拉唑、非那西丁、咪達唑侖和美托洛爾的超高效液相色譜-質(zhì)譜（UPLC- MS）的方法，研究穿心蓮內(nèi)酯對5種探針藥在大鼠體內(nèi)

2、的藥代動力學的影響，為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。
　　方法：①以甲苯磺丁脲、奧美拉唑、非那西丁、咪達唑侖和美托洛爾這5個藥作為底物，采用Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱分離，色譜流動相均采用乙腈-水-0.1％三氟乙酸體系。采用差速離心法制備肝微粒體并且測定肝微粒體濃度。大鼠肝微粒體分別加入以上五個底物，在37 oC條件下孵育一定時間后，終止反應，經(jīng)有機相提取后，用建立的 HPLC方法測定底物及其代謝物的濃度，根據(jù)米

3、氏方程分別計算五個底物的 Km值。然后分別以五個底物 Km值附近濃度作為底物濃度，分別將不同濃度的穿心蓮內(nèi)酯加入到上述體系中，以計算半數(shù)最大抑制濃度（IC50）。②雄性SD大鼠12只，將其隨機分成2組（對照組和穿心蓮內(nèi)酯組），每組為6只。其中對照組給予生理鹽水灌胃，劑量為5ml/kg，1天給藥1次，連續(xù)給藥七天；穿心蓮內(nèi)酯組給予穿心蓮內(nèi)酯灌胃，劑量為10mg/kg，1天給藥1次，連續(xù)給藥七天。第七天最后一次給藥30min后，2組動物同時

4、灌胃給予甲苯磺丁脲1mg/kg、奧美拉唑10mg/kg、非那西丁5mg/kg、咪達唑侖10mg/kg以及美托洛爾20mg/kg；在給予5個探針藥后不同時間點尾靜脈分別進行采血0.3ml，分離血漿。用建立的UPLC- MS方法同時測定血漿中5個探針藥的濃度；用DAS3.0程序分別計算5個探針藥的主要藥代動力學參數(shù)（Cmax, CLz/F, Tmax, t1/2, AUC(0-t), AUC(0-∞)），用SPSS17.0軟件比較2組主要藥

5、代動力學參數(shù)的差異。
　　結(jié)果：⑴100μM的穿心蓮內(nèi)酯可以明顯抑制大鼠肝微粒體CYP450五個亞型酶的活性，穿心蓮內(nèi)酯對大鼠肝微粒體中5個底物的半數(shù)最大抑制濃度（IC50）分別是2.654μM、1.113μM、9.608μM、16.40μM和20.67μM。⑵穿心蓮內(nèi)酯可以增加甲苯磺丁脲、奧美拉唑、非那西丁、咪達唑侖和美托洛爾的血藥濃度以及生物利用度。與對照組相比，穿心蓮內(nèi)酯組可使甲苯磺丁脲的清除率下降、峰濃度增加以及生物利用度

6、升高，而半衰期和達峰時間則無統(tǒng)計學差異；穿心蓮內(nèi)酯使奧美拉唑、非那西丁和美托洛爾峰濃度和生物利用度升高，而半衰期、清除率和達峰時間則無統(tǒng)計學差異；穿心蓮內(nèi)酯對咪達唑侖的主要藥動學參數(shù)均無統(tǒng)計學差異。
　　結(jié)論：①建立的HPLC分別檢測大鼠肝微粒體中甲苯磺丁脲、奧美拉唑、非那西丁、咪達唑侖和美托洛爾及其的代謝物方法，專屬性高，分離完全，檢測時間快，適合CYP450酶五個亞型酶藥代動力學研究。②建立的同時檢測大鼠血漿中甲苯磺丁脲、奧美