利用PAMAM納米載體遞送GCS siRNA逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥的研究.pdf

1、通過RNAi干擾技術(shù)使GCS siRNA復合物能夠高效沉默目的基因GCS，從而有效逆轉(zhuǎn)腫瘤的多藥耐藥效應MDR。同時聯(lián)合傳統(tǒng)的化療藥物紫杉醇注射液達到更有效的治療作用。針對RNAi面臨的問題，我們希望可以構(gòu)建一種新型的納米遞送體系來達到此目的。
　　關(guān)于本課題的研究進行了以下工作內(nèi)容：對于GCS在MCF-7敏感細胞株MCF-7/ADR耐藥細胞株的表達情況通過WB和RT-PCR進行檢測。檢測結(jié)果表明：GCS在這兩個細胞株中的表達存在

2、差異，它在后者中的表達高于其在前者中的表達。接著，進行納米載體系統(tǒng)的制備與優(yōu)化，在之前基礎(chǔ)上構(gòu)建了合適N/P比的二元復合物，再加以EGF修飾降低細胞毒性和增強靶向性。然后對構(gòu)建的三元復合物進行表征檢測，包括MTT細胞毒性檢測檢測、瓊脂糖凝膠電泳檢測、Zeta電位檢測，并對最終制備的優(yōu)化體系進行了TEM和粒徑檢測。緊接著將此優(yōu)化體系轉(zhuǎn)染進入細胞進行相關(guān)的檢測。通過Confocal觀察優(yōu)化體系的轉(zhuǎn)染效率和在細胞中的定位情況、阿霉素攝取情況，

3、結(jié)果表明：復合物轉(zhuǎn)染進入細胞后降低了耐藥細胞的耐藥性，增強了對阿霉素的攝取。轉(zhuǎn)染效率通過定性、定量檢測方法(RT-PCR、WB和qPCR)進行。結(jié)果同時表明：GCS siRNA在一定程度上沉默了目的基因的表達并且與之相關(guān)的MDR的表達量也有所降低。隨后，MTT檢測了siRNA復合物聯(lián)合傳統(tǒng)化療藥物紫杉醇注射液的作用效果，結(jié)果表明:二者聯(lián)合的作用效果確實要明顯優(yōu)于單獨紫杉醇注射液產(chǎn)生的作用效果。同時，通過流式進一步檢測聯(lián)合用藥對細胞凋亡和