Gsdma3基因在小鼠皮膚上皮細胞中對Wnt5a, E-cadherin,NF-κB表達影響的研究.pdf

1、研究背景和目的:
　　Gsdma3基因是Gsdm基因家族中位于小鼠第11號染色體的亞家族Gsdma基因家族成員之一,Gsdma基因家族成員同視黃酸受體α及角質蛋白1的編碼基因緊鄰。Gsdma3基因存在的熱點突變區(qū)域能分別產生6種Gsdma3突變體,Bsk, Dfl, Rco2, Fgn, Rex-denuded和Rim3,這6種突變體在皮膚上皮組織中會引起毛囊周期中第一次生長期的延長,皮膚的過度增生,并使得皮膚產生炎癥反應。經典W

2、nt/β-catenin信號通路對皮膚上皮細胞的增殖,分化具有重要的調節(jié)作用,而我們前期研究結果提示, Gsdma3基因同經典 Wnt/β-catenin信號通路在小鼠皮膚上皮細胞中存在關聯(lián),所以本研究的目的在于:
　　1、初步探明在小鼠皮膚上皮細胞中,Gsdma3基因對抑制經典 Wnt/β-catenin信號通路的Wnt5a表達的影響。
　　2、初步探明在小鼠皮膚上皮細胞中,Gsdma3基因對抑制經典 Wnt/β-cate

3、nin信號通路的E-cadherin表達的影響。
　　3、初步探明在小鼠皮膚上皮細胞中,Gsdma3基因對能夠與β-catenin蛋白形成激活蛋白復合體的NF-κB蛋白表達的影響。
　　方法:
　　1、本研究利用 C57BL/6J小鼠,Gsdma3基因突變鼠及 Gsdma3基因表達質粒等材料,通過質粒轉染、組織切片、免疫熒光、RT-PCR、WB等技術手段,在 Gsdma3基因突變及突變挽救后,分析在體小鼠皮膚上皮細胞中

4、,Gsdma3基因對 Wnt5a, E-cadherin,NF-κB表達變化的影響情況。
　　2、利用體外培養(yǎng)的小鼠皮膚上皮細胞和 Gsdma3基因表達質粒,質粒轉染、流式細胞術、免疫熒光、RT-PCR、WB等技術手段,在離體水平上分析了培養(yǎng)的小鼠皮膚上皮細胞Gsdma3基因過表達后,Gsdma3基因對 Wnt5a,E-cadherin,NF-κB表達變化的影響情況。
　　結果:
　　1、在體水平上,免疫熒光結果顯示,

5、Gsdma3基因突變鼠皮膚上皮細胞中Wnt5a的表達上調;Gsdma3基因突變鼠進行Gsdma3基因表達挽救后,Wnt5a的表達下調。同樣,在7周 C57BL/6J小鼠毛囊周期同步化的背部皮膚上皮細胞中過表達 Gsdma3基因后也會引起Wnt5a的表達下調。
　　在離體水平上,RT-PCR, Western blot結果顯示,在培養(yǎng)的小鼠皮膚上皮細胞中過表達Gsdma3基因后,Wnt5a的表達呈現(xiàn)下調趨勢。
　　2、在體水平

6、上,免疫熒光,RT-PCR, Western blot結果顯示,Gsdma3基因突變鼠皮膚上皮細胞中 E-cadherin的表達在突變鼠中具有顯著的上調現(xiàn)象;Gsdma3基因突變鼠進行Gsdma3基因表達挽救后,E-cadherin的表達下調。同樣,在7周C57BL/6J小鼠毛囊周期同步化的背部皮膚上皮細胞過表達 Gsdma3基因后也會引起 E-cadherin的表達下調。
　　在離體水平上,免疫熒光,RT-PCR, Wester

7、n blot結果顯示,在培養(yǎng)的小鼠皮膚上皮細胞中過表達Gsdma3基因后E-cadherin的表達具有顯著的下調現(xiàn)象。
　　3、在體水平上,免疫熒光,RT-PCR, Western blot結果顯示,Gsdma3基因突變鼠皮膚上皮細胞中NF-κB的表達具有顯著的上調現(xiàn)象。
　　在離體水平上,免疫熒光,RT-PCR, Western blot結果顯示,在培養(yǎng)的小鼠皮膚上皮細胞中過表達Gsdma3基因后NF-κB的表達具有顯著的