利用具備N-糖基化途徑的家蠶細胞系表達糖基化蛋白研究.pdf

1、昆蟲-桿狀病毒表達系統以其效率高、周期短、成本低的優(yōu)點，自其介導的外源基因表達首次被報道以來，已有近千種外源蛋白在該系統中得以成功表達.設想如果可以將昆蟲-桿狀病毒表達系統表達的蛋白質應用于生產、生活和臨床中，必將具有重大現實意義.但是，隨著研究的深入卻發(fā)現該系統存在一定缺陷，主要表現在昆蟲/昆蟲細胞內表達的蛋白質往往不具備復雜的蛋白質糖鏈.然而，在翻譯之后可以直接發(fā)揮作用的蛋白質很少，絕大多數蛋白質需要修飾后才能發(fā)揮其生物學功能，并且

2、糖基化修飾是蛋白質翻譯后修飾中最重要的之一.因此對昆蟲-桿狀病毒表達系統的改進的關注點主要集中在了增加其表達的糖基化蛋白的復雜程度，使其產生生物功能和活性類似于哺乳動物的糖蛋白。
　　 本研究是在胡嘉彪等獲得的轉入哺乳動物細胞4種糖基轉移酶基因的家蠶BmN轉基因細胞的基礎上，通過酶活檢測以及糖基化蛋白表達和糖型鑒定的方法來驗證轉基因細胞的功能。在酶活檢測方面，比較了正常BmN細胞和轉基因細胞的beta-1,4-半乳糖轉移酶(Ga

3、lT)活性.在糖蛋白表達和檢測方面，利用正常BmN細胞和轉基因細胞分別表達糖基化蛋白—人丁酰膽堿酯酶（hBchE），并利用基質輔助激光解吸附飛行時間質譜法(MALDI-TOF-MS)檢測細胞總糖糖型，來比較兩種細胞的差異，以達到驗證其糖基化作用的目的。
　　 結果表明本實驗室所構建的含人源性糖?；富虻霓D基因家蠶細胞系，經過傳代15代，細胞系生長良好，狀態(tài)正常，呈梭型，貼壁好，轉基因細胞在紫外光下可見綠色熒光;測定轉基因細胞中