大黃素對百草枯誘導(dǎo)肺細(xì)胞損傷的保護(hù)作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討大黃素對百草枯(PQ)誘導(dǎo)的A549細(xì)胞損傷是否具有保護(hù)作用，并進(jìn)一步探究其是否通過抑制細(xì)胞凋亡途徑和由Nrf-2介導(dǎo)的抗氧化應(yīng)激通路來拮抗百草枯中毒。
　　方法：
　?。?）培養(yǎng)肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549并建立PQ中毒的細(xì)胞模型，設(shè)立PQ組，大黃素干預(yù)組，及陰性對照組；
　?。?）MTT法檢測在不同處理條件下各組A549細(xì)胞存活率；
　?。?）熒光顯微鏡及活性氧（ROS）檢測試劑盒檢測各組細(xì)胞內(nèi)ROS總量；

2、
　?。?）線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-1)檢測各組細(xì)胞線粒體膜電位的改變；
　　（5）Annexin V/PI雙標(biāo)記法檢測各組組中細(xì)胞凋亡的情況；
　　（6）QPCR和Western-blot檢測各組中Nrf2、HO-1、NQO1、P53、Bcl2、Bax mRNA及蛋白水平表達(dá)的變化情況；
　　結(jié)果：
　　(1)MTT實驗結(jié)果提示PQ濃度越高，對A549細(xì)胞毒性越大；低濃度大黃素對A549細(xì)胞活力沒有

3、明顯影響；且能緩解PQ誘導(dǎo)A549產(chǎn)生的損傷作用。
　　(2)ROS檢測顯示提示：大黃素預(yù)處理A549細(xì)胞，能減少由PQ染毒所產(chǎn)生的大量ROS從而發(fā)揮保護(hù)作用。
　　(3)線粒體膜電位檢測實驗結(jié)果表明大黃素能穩(wěn)定A549細(xì)胞膜電位，一定程度上減輕PQ致A549細(xì)胞膜電位下降而產(chǎn)生的一系列損傷作用。
　　(4)細(xì)胞凋亡率檢測提示大黃素能減輕PQ引起的細(xì)胞凋亡；
　　(5)Western Blot和QPCR結(jié)果提示：

4、PQ誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)基因Bax、P53表達(dá)，抑制抗凋亡基因Bcl-2表達(dá)水平；但大黃素能上調(diào)細(xì)胞內(nèi)Bcl-2表達(dá)水平，抑制凋亡相關(guān)基因Bax，P53表達(dá)；同時刺激Nrf-2基因高表達(dá)以及下游的抗氧化損傷基因HO-1，NQO1基因的表達(dá)。
　　結(jié)論：
　?。?）低濃度大黃素對百草枯誘導(dǎo)的A549細(xì)胞損傷能發(fā)揮保護(hù)作用；
　?。?）大黃素能穩(wěn)定線粒體膜電位，抑制PQ誘導(dǎo)的A549細(xì)胞凋亡；
　?。?）大黃素可能通過