肺炎支原體感染的臨床治療分析及免疫學致病機制研究.pdf

1、目的：
　　 肺炎支原體(Mycoplasma pneumoniae，MP)是人類支原體性肺炎的病原菌，近年來其感染表現為肺外并發(fā)癥多樣，難治性肺炎病例增多，其具體致病機制目前尚不明確。臨床治療MP感染的首選藥物是大環(huán)內酯類抗生素，然而MP23SrRNA基因突變會導致大環(huán)內酯類抗生素耐藥，國內外報道，MP耐藥基因突變株不斷增多，我國北京地區(qū)MP耐藥基因檢出率甚至高達90％。然而體外藥物敏感性試驗的結果不能代表藥物體內真實的治療效

2、果，而且由于肺炎支原體分離培養(yǎng)困難，目前MP對大環(huán)內酯類藥物的體外敏感性試驗并不是臨床常規(guī)檢測項目。學者們建立了各種耐藥基因突變檢測方法，希望可以應用于臨床肺炎支原體耐藥性檢測。本實驗旨在通過分析大環(huán)內酯類抗生素對MP耐藥基因突變株的臨床治療效果，評價進行MP耐藥基因檢測的臨床意義，并通過MP感染的大鼠模型探討MP致病的免疫學機制，以期為臨床治療肺炎支原體感染提供依據。
　　 方法：
　　 1.MP感染的臨床治療分析。選

3、取符合納入條件的66例疑為支原體肺炎的住院患者，男33例，女33例，采集患者肺泡灌洗液、痰及咽拭子標本，PCR方法進行MP DNA檢測及包含有突變位點的933bp片段擴增，擴增片段進行核酸序列測定。結合病歷資料，選擇病人發(fā)熱天數、住院天數、使用激素及并發(fā)癥出現情況做為分析指標，對耐藥基因突變株與非突變株進行比較，分析大環(huán)內酯類抗生素對MP耐藥基因突變株的臨床治療效果。
　　 2.MP免疫學致病機制研究。45只大鼠隨機分為感染組2

4、5只，對照組20只，感染組在無菌操作臺經鼻連續(xù)4天接種100μ l(106CFU/ml)MP，對照組同樣條件下經鼻連續(xù)4天接種100μlMP液體培養(yǎng)基。接種完成后1、3、5、8、10天時，分批處死感染組和對照組大鼠，采集肺泡灌洗液和肺組織。采用熒光定量PCR方法測定大鼠肺泡灌洗液中MP DNA含量，ELISA方法檢測肺泡灌洗液Th1/Th2類細胞因子，對大鼠肺組織標本進行HE染色后進行肺組織病理學評分。分析大鼠感染MP后肺泡灌洗液中Th

5、1、Th2類細胞因子的動態(tài)變化，研究MP感染與機體免疫系統間的相互作用，了解其致病機制。
　　 結果：
　　 1.66例病人中46例病人MP DNA陽性，20例為陰性，肺泡灌洗液、痰液、咽拭子NIP分離率分別為69.7％、18.2％、6.1％，肺泡灌洗液分離率高于痰液和咽拭子(P<0.01)；46份MPDNA樣品中有31份存在耐藥基因突變，突變率為67.4％(31/46)，均為2063A→G突變，并未發(fā)現其它位點突變；耐

6、藥基因突變株(macrolide-resistant，MR)與非突變株(macrolide-susceptible，MS)病人的發(fā)熱天數、住院天數、激素使用及并發(fā)癥出現情況均無統計學差異(P值分別為0.459、0.632、0.793、0.575)。
　　 2.感染組大鼠造模后第三天炎癥達到最重，肺組織病理評分為14.7(最高分為16分)，第五天炎癥評分有所下降，病理評分為9.7分，對照組無明顯病理改變，感染組熒光定量PCR在整個

7、過程中均能檢測到MP，且MP DNA含量相對穩(wěn)定，天間相比并無統計學差異；大鼠Th1類細胞因子IFN-γ在感染MP后升高，第3天達到峰值，且IFN-γ的水平與肺組織病理學評分呈正相關(R=0.900，P<0.05)，而Th2細胞因子IL-4在感染后并無明顯變化。
　　 結論：
　　 本研究結果表明：MP大環(huán)內酯類耐藥基因突變檢出率為63.4％，均為2063A→G突變；肝耐藥基因突變株與非突變株病人在發(fā)熱天數、住院天數、激

8、素使用情況及并發(fā)癥情況上均無差別，大環(huán)內酯類抗生素對MP耐藥基因突變株的治療效果可能與其抑制細菌蛋白合成外的免疫調節(jié)活性有關，因此建議臨床不必常規(guī)開展MP耐藥基因檢測；MP耐藥不導致患者病程延長及并發(fā)癥增多，因此推測本身攜帶耐藥基因可能不是導致難治性MP肺炎的主要原因，具體機制還有待于進一步研究；MP感染大鼠后促進炎癥的Th1類細胞因子升高，且其濃度與肺組織病理評分具有相關性，而起抗炎作用的Th2類細胞因子并無明顯變化，大鼠Th1/Th