一種新的p53負(fù)調(diào)控分子Krana的功能研究.pdf

1、一種新的p53負(fù)調(diào)控分子Krana的功能研究抑癌蛋白p53位于調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)展及凋亡發(fā)生的蛋白網(wǎng)絡(luò)的中心位置，它作為一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，在細(xì)胞受到DNA損傷或異常增殖信號(hào)等多種因素的刺激下，被激活發(fā)揮周期阻滯和/或誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。對(duì)p53的精密調(diào)節(jié)在維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和防止癌變等方面起著非常重要的作用。在正常生理狀態(tài)下，p53的多種負(fù)調(diào)控分子，如HDM2、COP1、Sir2α、hCtBP2等與之相互作用，使其活性維持在較低水平。多種

2、刺激信號(hào)通過不同的途徑將p53從這些負(fù)調(diào)控分子的抑制狀態(tài)釋放從而被激活。含有KRAB(Kruppel-associatedbox)結(jié)構(gòu)域的鋅指蛋白(KZNF)是人類基因組中最大的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子家族。本文鑒定了一個(gè)新的KZNF基因，它編碼的蛋白含有N端KRAB結(jié)構(gòu)域和19個(gè)C2H2型鋅指結(jié)構(gòu)以及3個(gè)潛在的ATM激酶位點(diǎn)，故將其命名為Krana(Krabdomainandnineteenzincfingers-containingATM-as

3、sociatedprotein)。Krana多均勻定位在核質(zhì)中，部分聚集分布在核仁，具有選擇性的轉(zhuǎn)錄抑制功能，能抑制包括p53在內(nèi)的多種轉(zhuǎn)錄因子的活性。其中，Krana對(duì)p53的抑制功能主要表現(xiàn)在抑制其轉(zhuǎn)錄活性、下調(diào)其多種靶基因的表達(dá)水平以及降低其引起的細(xì)胞凋亡。通過RNAi敲低內(nèi)源Krana的表達(dá)水平可以增強(qiáng)p53介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。Krana能夠通過其C端的鋅指區(qū)與p53結(jié)合，共定位于核質(zhì)中，因此，Krana是一種新的p53負(fù)調(diào)控分子。

4、多種細(xì)胞的應(yīng)激信號(hào)(熱休克和DNA損傷信號(hào)如DNA烷化劑MMS處理)能夠?qū)е翶rana從核質(zhì)向核仁移位，使之與p53解離，從而降低其對(duì)p53的抑制功能，增強(qiáng)p53的活性。這些因素對(duì)Krana的調(diào)節(jié)作用依賴于DNA損傷蛋白激酶ATM的正常功能。我們發(fā)現(xiàn)，Krana通過其N端的KRAB結(jié)構(gòu)域與ATM結(jié)合，作為橋梁蛋白穩(wěn)定ATM和p53在細(xì)胞內(nèi)的結(jié)合；熱休克和MMS處理后，三者的相互作用解離。此外，p14ARF作為主要受癌基因激活而正調(diào)控p5