阿托伐他汀鈣對成骨細胞增殖和OPG-RANL系統的影響.pdf

1、背景：他汀類藥物，是目前臨床上用于降低血膽固醇的藥物，但是在一項回顧性研究中顯示，老年婦女服用他汀類藥物在降低膽固醇的同時，髖骨密度明顯增加，提示他汀類具有改善骨密度的作用。OPG/RANKL系統是近年發(fā)現的，在骨質疏松的發(fā)病機制及治療中起著重要作用的一個系統。
　　 目的：研究不同濃度的阿托伐他汀鈣對體外培養(yǎng)的原代成骨細胞增殖的影響及對OPG，RANKL，M-CSF基因表達的影響，探討阿托伐他汀鈣抗骨質疏松的分子機制，為臨床用

2、藥提供實驗依據。
　　 方法：（1）采用胰酶和Ⅰ型膠原酶混合酶消化法分離獲得原代成骨細胞；采用“差速貼壁法”進行純化。光鏡下觀察細胞的形態(tài)結構和生長狀況，通過堿性磷酸酶染色和Ⅰ型膠原免疫組化染色SABC法對細胞進行鑒定。（2）取第二代成骨細胞，用不同濃度的阿托伐他汀鈣（10-9，10-8，10--7，10-6，10-5mol/L）干預成骨細胞，在24h，48h，72h后分別采用噻唑藍(MTT)法測定其在490nm處的吸光度值（O

3、D值），了解阿托伐他汀鈣對細胞增殖的影響。（3）用不同濃度的阿托伐他汀鈣（10-9，10-8，10--7，10-6，10-5mol/L）干預成骨細胞，在24h，48h，72h后，用實時熒光定量方法檢測OPGmRNA，RANKLmRNA,M-CSFmRNA的表達水平。（4）統計學方法：各實驗數據采用±ｓ表示，應用SPSS17.0統計軟件進行統計分析，各組間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA)。P﹤0.05，有顯著性差異。<

4、br>　　 結果：（1）鏡下觀察所獲得的細胞具有成骨細胞的典型特征，細胞多為單核，呈三角形、多邊形、長梭形等形態(tài)，并伸有粗大偽足；堿性磷酸酶染色及Ⅰ型膠原免疫組化染色呈陽性。（2）MTT法結果顯示：不同濃度的阿托伐他汀鈣（10-9，10-8，10--7，10-6，10-5mol/L）在作用于大鼠原代成骨細胞24小時后，與空白對照組比較，各加藥組吸光度值（OD值）沒有顯著統計學差異（P＞0.05）。在作用48小時及72小時后，與空白對照

5、組比較，各加藥組OD值均大于對照組，在濃度為10-9，10-8，10-7 ，10-6mol/L時具有統計學差異（P﹤0.05）。（3）實時熒光定量PCR結果顯示：不同濃度的阿托伐他汀鈣（10-9，10-8，10-7，10-6，10-5mol/L）可以促進OPG及M-CSF基因mRNA的表達，抑制RANKL基因mRNA的表達，這種作用可能和藥物濃度及作用時間有關。
　　 結論：（1）采用胰酶和Ⅰ型膠原酶混合酶消化法體外分離成骨細胞