炎性腸病大鼠胃腸動力障礙及其機制的研究.pdf

1、目的：
　　 在大鼠結腸炎模型基礎上，通過觀察SD大鼠結腸炎癥時，胃腸傳輸速率的變化，肌間神經叢內膽堿能和氮能神經元的形態(tài)學改變，電鏡下Cajal間質細胞、肌間神經、平滑肌以及三者間聯系的超微結構變化，以及Cajal間質細胞膜上特異性標記c-kit蛋白表達的改變，探討炎性腸病大鼠胃腸動力障礙的機制。
　　 方法：
　　 將40只SD大鼠按照隨機分配原則分成對照組和急性結腸炎組。急性結腸炎模型采用乙酸灌腸法制備，將

2、SD大鼠禁食不禁水24h后，用2％戊巴比妥鈉(50mg/kg)腹腔注射麻醉，用聚乙烯導管插入大鼠結腸內，插入深度約6～8cm，腸炎組大鼠向其腸腔快速注入50mL/L乙酸溶液0.5mL（對照組大鼠向其腸腔注入等量生理鹽水），讓大鼠處于頭低尾高位20s后，用生理鹽水快速沖洗結腸3次；造模第3天，兩組大鼠禁食24h，次日分別經口灌入印度墨汁0.5mL，30min后麻醉，剖腹取出賁門至直腸末端快速測量墨汁在胃腸道的推進長度及胃腸道全長的長度，并

3、計算墨汁推進百分比，即胃腸傳輸速率；分別取兩組大鼠遠端結腸組織標本，固定，顯微鏡下分離外縱肌層，用AchE酶染色和NOS酶染色的組織化學方法觀察結腸肌間神經叢內膽堿能和氮能神經的組織學改變；再取兩組大鼠遠端結腸組織標本固定、脫水、包埋，常規(guī)半薄切片，超薄切片，硝酸鉛、醋酸鈾染色，用透射電鏡觀察Cajal間質細胞、肌間神經和平滑肌的超微結構變化；采用WestonBlot方法檢測Cajal間質細胞膜c-kit蛋白表達。
　　 結果：

4、
　　 與對照組大鼠相比，急性結腸炎大鼠胃腸傳輸速度明顯減慢(P＜0.05)；其肌間神經叢內膽堿能和氮能神經元的密度均明顯降低(P＜0.05)；電鏡下，對照組大鼠遠端結腸肌層超微結構為：Cajal間質細胞呈紡錘形，有巨大的卵圓形核及向外伸展的長突起，胞質內有豐富的線粒體，大量的粗面內質網和光面內質網；肌間神經細胞內見較多的神經分泌顆粒；平滑肌細胞內大量排列整齊的肌絲，見豐富的密體和密斑，細胞膜緣有大量的質膜內褶，可見Cajal間

5、質細胞與腸神經元及平滑肌細胞之間緊密聯系。而急性腸炎組遠端結腸肌層中Cajal間質細胞體積增大．結構破壞，電子密度降低，胞質內線粒體腫脹、部分線粒體空泡樣變，溶酶體數目增多，并出現次級溶酶體，內質網擴張；肌間神經細胞胞漿內的線粒體腫脹，內質網擴張，溶酶體數量增加，神經軸索水腫，微管結構不清，神經分泌顆粒減少；平滑肌細胞內出現腫脹的線粒體，肌絲結構不清，細胞膜小凹減少，甚至空泡形成，Cajal間質細胞與神經細胞及平滑肌間連接減少，連接松散

6、；Westernblot分析結果顯示對照組大鼠遠端結腸組織中Cajal間質細胞c-kit蛋白質呈陽性表達，但與對照組相比，急性腸炎組c-kit蛋白質的表達量顯著降低(P＜0.05)。
　　 結論：
　　 1．炎性腸病可導致胃腸動力障礙即胃腸傳輸速率下降。
　　 2．引起炎性腸病大鼠胃腸動力障礙的原因是多方面的：
　　 (1)與腸神經系統(tǒng)(entericnervoussystem，ENS)的改變有關包括：肌

7、間神經叢內膽堿能和氮能神經元的密度均明顯降低；肌問神經細胞胞漿內的線粒體腫脹，內質網擴張，溶酶體數量增加，神經軸索水腫，微管結構不清，神經分泌顆粒減少。
　　 (2)與Cajal間質細胞(ICC)的改變有關包括：Cajal間質細胞體積增大，結構破壞，電子密度降低，胞質內線粒體腫脹、部分線粒體空泡樣變，溶酶體數目增多，出現次級溶酶體，內質網擴張；c-kit蛋白質的表達量降低。
　　 (3)與平滑肌細胞的改變有關包括：平滑肌