多重?zé)晒舛縋CR檢測(cè)艱難梭菌感染的方法探索.pdf

1、目的：近年來(lái)，隨著艱難梭菌流行菌株027等的出現(xiàn)，艱難梭菌的發(fā)病率及致死率越來(lái)越高，快速、準(zhǔn)確檢測(cè)艱難梭菌對(duì)臨床決策非常重要。本研究旨在建立一種可以同時(shí)檢測(cè)艱難梭菌主要毒素基因tcdA、tcdB的多重定量PCR方法。
　　方法：收集2014.10-2015.03月期間臨床送檢的大便標(biāo)本，進(jìn)行分離培養(yǎng)，可疑菌落經(jīng)基質(zhì)輔助激光解吸飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)及擴(kuò)增16sRNA鑒定，獲得的菌株分別采用普通PCR及Taqman探針?lè)ǘ嘀囟縋CR檢測(cè)

2、艱難梭菌毒素基因tcdA、tcdB及管家基因TPI。
　　結(jié)果：在收集到的107株符合要求的大便標(biāo)本中，經(jīng)鑒定共分離出20株艱難梭菌。普通PCR檢測(cè)結(jié)果為：tcdA-tcdB-的菌株為4株， tcdA+tcdB+的菌株為16株，未發(fā)現(xiàn)tcdA-tcdB+的菌株，陽(yáng)性率為18.7％。應(yīng)用本研究設(shè)計(jì)的引物及探針對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)tcdA擴(kuò)增效率可達(dá)91%，最低檢測(cè)限為101，TPI擴(kuò)增效率僅為79%，最低檢測(cè)限為102，未能成功檢