離子交換色譜中新型樹枝狀頂替劑的設計、合成及性能評價.pdf

1、作為一種非線性的色譜技術，頂替色譜自問世以來以分辨率高和處理量大而受到業(yè)界極大的關注。尋找廉價、易得的頂替劑一直是頂替色譜研究的重要方向。 本文通過對頂替色譜中蛋白質頂替行為的分析提出了一種基于氨基酸的頂替劑構建策略，并在此基礎上設計了以氨基酸為延伸單元、賴氨酸為分支單元的樹枝狀頂替劑化學庫。通過引入了疏水性因子(IogP)作為頂替劑初步篩選的依據，本文對以苯丙氨酸出發(fā)構建的樹枝狀頂替劑進行了初步篩選。理論計算表明，在頂替劑分子

2、中引入側鏈含有苯環(huán)的氨基酸后，將導致頂替劑疏水性因子的明顯增大。由此，本文分別選擇了以苯丙氨酸、亮氨酸和甘氨酸為單體的樹枝狀頂替劑(Phe-D、Leu-D、Gly-D)，采用固相合成的方法進行制備，并比較了它們的性能。采用固相合成技術合成的頂替劑的質譜圖顯示該頂替劑分子量均勻且具有較高的純度。 本文采用空間質量作用(SMA)模型研究了蛋白質(細胞色素C和α-糜蛋白酶原A)和頂替劑的動態(tài)親和性。首先，本文利用恒定洗脫實驗和線性梯度

3、實驗測得SMA線形參數，并利用非線形最小二乘法對利用靜態(tài)吸附實驗獲得的平衡數據規(guī)劃求解確定SMA非線形參數。進而，利用SMA模型參數作出親和等級圖和動力學親和圖來確定頂替色譜的操作條件并預測在頂替色譜過程中蛋白流出色譜柱的順序。 最后，本文采用靜態(tài)頂替實驗研究了合成頂替劑的頂替性能并與BAEE頂替劑進行了對比。靜態(tài)頂替實驗結果表明，三種頂替劑對Cyt-C和Chy-A表現(xiàn)出了更高的頂替率，尤以Phe-D表現(xiàn)得最為顯著。這種頂替效果