家蠶脂肪體變態(tài)發(fā)育的蛋白質組研究及Hemolin與Yippee蛋白相互作用.pdf

1、家蠶（Bombyx mori）是一種重要的鱗翅目模式昆蟲，是研究變態(tài)發(fā)育的理想材料。脂肪體是體內的一種重要組織器官，它既是代謝中心，又是激素作用的靶組織，在家蠶生長發(fā)育和變態(tài)過程中發(fā)揮著極其重要的作用。我們進行了家蠶脂肪體在變態(tài)發(fā)育過程中的蛋白質組學研究，以期找到與變態(tài)發(fā)育密切相關的蛋白。另外昆蟲翅的發(fā)育是一個典型的變態(tài)過程，我們對在翅原基中表達的Hemolin蛋白和Yippee蛋白進行了相互作用研究，為今后研究兩者在發(fā)育過程的作用提供

2、依據。本研究得到如下一些結果：
　　1.從家蠶五齡幼蟲期和蛹期不同發(fā)育階段提取脂肪體總蛋白，利用雙向電泳技術進行分離和鑒定，找出不同時期的27個差異蛋白點；對這些蛋白進行質譜分析及數據庫檢索，檢索到相匹配的候選蛋白質，這些蛋白與物質和能量代謝、細胞骨架、蛋白質代謝與合成、生長發(fā)育、信號轉導等生理活動緊密相關，在家蠶生長發(fā)育與變態(tài)發(fā)育的過程中可能發(fā)揮著重要的功能和作用。
　　2.從27個差異蛋白點中選取了9個蛋白相對應的基因進

3、行熒光定量分析，其中有70K熱休克蛋白、脯氨酰羥化酶、延伸因子、谷胱甘肽硫解轉移酶、琥珀酰輔酶 A、胰凝乳蛋白酶抑制劑、胞質甲酰四氫葉酸脫氫酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶等等，并對它們在變態(tài)發(fā)育中的可能作用進行了分析。
　　3.通過制備抗體來研究Hemolin蛋白與Yippee蛋白之間的相互作用。我們用新西蘭大白兔制備了家蠶Yippee蛋白的多克隆抗血清，Western Blotting結果顯示出我們制備的家蠶Yippee蛋白兔多

4、克隆抗血清具有較好的特異性。
　　4.利用本實驗室之前制備的家蠶Hemolin鼠多克隆抗血清和Yippee蛋白兔多克隆抗血清對Hemolin和Yippee蛋白進行了免疫共沉淀和雜交實驗，結果證明了Hemolin和Yippee蛋白在家蠶翅原基中有相互作用。
　　通過上述研究我們找到了一些與變態(tài)發(fā)育有關的重要蛋白，對變態(tài)發(fā)育的研究有著一定的參考價值。我們提出了一個關于Hemolin與Yippee蛋白的相互作用的一個假設，對揭示翅