重組大腸桿菌高效分泌表達雜合β-1,3-1,4-葡聚糖酶.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩122頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、β—葡聚糖酶是重要的工業(yè)用酶,可有效消除谷物β—葡聚糖在釀造和飼料工業(yè)中產(chǎn)生的負面影響。國內(nèi)對β—1,3—1,4—葡聚糖酶的研究還處于初級階段,天然菌株的產(chǎn)酶量及酶的性能滿足不了實際應用。然而,分子生物學、基因工程方法的應用為其提供了契機?,F(xiàn)在對β—1,3—1,4—葡聚糖酶的研究主要集中在構建基因工程菌株來提高酶的產(chǎn)量和性能方面。本研究應用工業(yè)生物技術進行了一系列的探索,旨在找到一種可持續(xù)發(fā)展的,可用于產(chǎn)業(yè)化、規(guī)?;纳a(chǎn)β—1,3—1

2、,4—葡聚糖酶的方法。主要研究內(nèi)容包括: 1.發(fā)酵罐流加培養(yǎng)重組大腸桿菌JM109—pLF3生產(chǎn)β—1,3—1,4—葡聚糖酶在原有優(yōu)化培養(yǎng)基基礎上,優(yōu)化了發(fā)酵工藝,在7 L發(fā)酵罐上進行了分批補料發(fā)酵產(chǎn)酶研究。結果表明,在12~32 h之間向發(fā)酵罐內(nèi)恒速流加雙倍濃縮的培養(yǎng)基氮源,對細胞生長和產(chǎn)酶有極大的促進作用。最大酶活增長到1680 U/mL,比間歇發(fā)酵提高了231.40%;最大細胞密度為7.67 g/L,是間歇發(fā)酵3.44倍

3、。 2.高效分泌表達β—1,3—1,4—葡聚糖酶重組大腸桿菌的構建 將熱穩(wěn)定性較好的雜合β—1,3—1,4—葡聚糖酶表達基因(bgl)插入質(zhì)粒pET-22b(+),并插入kil—Km分泌盒,得到了新的β—葡聚糖酶表達質(zhì)粒pET-22—bgl—(kil—Km)。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌E. coli JM109和BL21(DE3)。通過SDS—PAGE證明了含有質(zhì)粒pET-22—bgl—(kil—Km)的重組菌株具有目的

4、蛋白的高效分泌表達的功能。 3.響應面法優(yōu)化重組E. coli BL21(DE3)—pET-22—bgl—(kil—Km)產(chǎn)酶培養(yǎng)基 在TB培養(yǎng)基基礎上,通過單因素實驗選擇乳糖為最佳碳源,酪蛋白胨為最佳氮源。在單因素優(yōu)化基礎上采用Box—Behnken設計法和RSM響應面分析法考察主要影響因素乳糖濃度、酪蛋白胨濃度和碳氮比三因素的的交互作用。確定了重組E. coli BL21(DE3)—pET-22—bgl—(kil

5、—Km)產(chǎn)酶的優(yōu)化培養(yǎng)基配方為(g/L):酪蛋白胨33.39,乳糖8.03,甘油9.15,NaCl10.0,KH2PO42.31,K2HPO412.54。利用優(yōu)化培養(yǎng)基在37℃、150 rpm條件下,搖瓶培養(yǎng)32.5 h,酶活達到1242.94 U/mL,比初始培養(yǎng)基提高了3.3倍。 4.重組酶的分離純化和酶學性質(zhì)表征 利用Ni2+與6×His標簽特異性結合的性質(zhì)利用親和層析純化重組酶,該方法將目的蛋白純化了7.69

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論