化痰活血方和梓醇拮抗哮喘小鼠炎癥和黏蛋白MUC5AC機制的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:化痰活血這種治法常用于臨床,梓醇是化痰活血方地黃的有效成分之一,本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)化痰活血方和梓醇對哮喘小鼠有一定治療作用,其機制可能通過干預Notch信號的轉導,抑制哮喘哮喘小鼠中Th2細胞的異?;罨?,調(diào)節(jié)哮喘中Th1/Th2失衡,增加γ干擾素(INF-γ)分泌,減少白介素4(IL-4)和白介素17A(IL-17A)在哮喘小鼠肺泡灌洗液中的分泌。本次研究旨在探討化痰活血方和梓醇拮抗哮喘小鼠炎癥和黏蛋白MUC5AC的作用機制。體

2、外細胞水平研究梓醇對刺激劑EGF誘導的16HBE細胞上清液黏蛋白MUC5AC的影響。
  方法:
  1.采用多次腹腔注射并霧化激發(fā)卵清白蛋白(OVA)的方式建立小鼠哮喘模型。實驗第1、8、15d腹腔注射OVA,第21d起用2%OVA霧化激發(fā),連續(xù)霧化7d的方式建立哮喘模型。實驗9d起至第27d,分別灌胃化痰活血方和梓醇進行干預,第28d取樣觀察化痰活血方和梓醇對哮喘小鼠炎癥和黏蛋白MUC5AC的影響。實驗霧化期間,第25、

3、26、27d觀察小鼠的整體狀況并記錄引喘潛伏期;
  2.哮喘小鼠末次激發(fā)24h后,肺功能儀測定氣道阻力(RI);
  3.病理切片HE、PAS染色觀察肺組織病理變化和杯狀細胞增生的情況;
  4.BALF沉淀用細胞涂片瑞氏吉姆薩染色檢測炎性細胞的變化;
  5.酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測BALF中IL-5、MUC5AC、IL-10和TGF-β1含量的變化;
  6.MTT法檢測梓醇對刺激劑EGF誘導的1

4、6HBE細胞株活性的影響;
  7.ELISA檢測梓醇對16HBE細胞上清液中MUC5AC的影響;
  結果:
  1.霧化吸入OVA后,除正常組外,模型組小鼠出現(xiàn)頭、鼻部瘙癢、呼吸急促、毛發(fā)豎起、活動量減少等表現(xiàn),多次激發(fā)后,小鼠出現(xiàn)體重下降、毛發(fā)雜亂無光澤等癥狀,給予化痰活血方和梓醇干預后上述癥狀均得到不同程度的緩解,且化痰活血方組和梓醇組哮喘小鼠的哮喘潛伏期明顯比模型組延長(P<0.01);
  2.各組小

5、鼠氣道阻力值RI均隨著乙酰甲膽堿濃度的增加(0、6.25、12.5、25、50mg/mL)而增大,模型組氣道阻力值RI明顯大于正常組,在25mg/mL和50mg/mL時差異最顯著,有統(tǒng)計學意義(P<0.01),給予不同劑量的化痰活血方和梓醇干預后,RI值均不同程度的下降(P<0.05或P<0.01);
  3.哮喘組小鼠氣管、肺泡及肺間質(zhì)周圍有大量炎性細胞浸潤,基底膜增厚,氣道粘膜上皮脫落,粘膜上皮不完整,黏蛋白高分泌和杯狀細胞增

6、生,化痰活血方和梓醇干預后上述癥狀得到不同程度緩解;病理評分結果及陽性面積統(tǒng)計顯示,模型組細小氣管周圍、血管周圍、肺間質(zhì)和總分的評分明顯高于正常組,模型組陽性面積明顯大于正常組(P<0.01),給予化痰活血方和梓醇干預后,可不同程度的降低細小氣管周圍、血管周圍、肺間質(zhì)和總分的評分和陽性面積的百分比;
  4.模型組的白細胞總數(shù)明顯高于正常組,其中單核細胞數(shù)最多;模型組小鼠BALF中細胞總數(shù)、嗜酸性粒細胞數(shù)及中性粒細胞數(shù)明顯增加,與

7、正常組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01);化痰活血方和梓醇干預后,BALF中細胞總數(shù)、嗜酸性粒細胞數(shù)及中性粒細胞數(shù)降低(P<0.05或P<0.01);
  5.模型組小鼠BALF中白介素5(IL-5)、MUC5AC含量明顯高于正常組,給予化痰活血方和梓醇干預后,IL-5、MUC5AC在BALF中的含量均不同程度的下降;哮喘模型組小鼠BALF中表介素10(IL-10)和轉化生長因子β1(TGF-β1)含量明顯低于正常組,給予化痰

8、活血方和梓醇干預后,IL-10和TGF-β1在BALF中的含量均不同程度的上升(P<0.05或P<0.01);
  6.梓醇(0.3μM、1μM、3μM、10μM、30μM、100μM、300μM)對刺激劑EGF誘導的16HBE細胞株增殖活性沒有影響;
  7.梓醇(3μM、10μM、30μM)對刺激劑 EGF誘導的16HBE細胞株上清液中的MUC5AC有一定抑制作用(P<0.01);
  結論:
  1.通過動

9、物整體狀況、哮喘潛伏期、HE染色和PAS染色的分析,本實驗成功建立哮喘模型;
  2.化痰活血方和梓醇可以降低哮喘模型小鼠 BALF中白細胞總數(shù)含量和炎性細胞數(shù)量如嗜酸性粒細胞、淋巴細胞、中性粒細胞的含量;
  3.化痰活血方和梓醇可以降低哮喘模型小鼠氣道阻力RI值;
  4.化痰活血方和梓醇可以緩解哮喘小鼠肺組織中炎性細胞浸潤、基底膜增厚、黏蛋白高分泌和杯狀細胞增生的癥狀;
  5.化痰活血方和梓醇可以降低IL

10、-5、MUC5AC在哮喘小鼠BALF中的含量,升高IL-10和TGF-β1在哮喘小鼠BALF中的含量;
  6.化痰活血方和梓醇對哮喘小鼠炎癥和黏蛋白MUC5AC有一定的抑制作用,其機制可能是通過調(diào)控炎癥細胞和調(diào)節(jié)性因子而發(fā)揮作用;
  7.梓醇(0.3μM、1μM、3μM、10μM、30μM、100μM、300μM)對16HBE細胞株增殖活性沒有影響;
  8.梓醇(3μM、10μM、30μM)對刺激劑 EGF誘導的

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