乙酰輔酶A酰基轉移酶1通過PTEN-Akt-EMT通路抑制鼻咽癌轉移的研究.pdf

1、研究背景:
　　鼻咽癌是一種來源于鼻咽部的惡性腫瘤，好發(fā)于我國的南方以及東南亞地區(qū)。目前認為鼻咽癌的病因是EB病毒、基因以及環(huán)境因素的相互作用，其發(fā)病是多步驟且復雜的過程。根據(jù)WHO的病理分型，鼻咽癌主要分為:非角化癌、角化型鱗狀細胞癌以及基底樣鱗狀細胞癌。鼻咽癌具有早期淋巴轉移的特點。對于無遠處轉移的鼻咽癌，主要采取以放射治療為主的綜合治療手段。遠處轉移是目前鼻咽癌治療失敗的主要原因。探索鼻咽癌轉移的機制，尋找可靠的抑制腫瘤轉移

2、的靶點，是目前鼻咽癌轉化醫(yī)學研究的熱點之一。在前期研究中，本課題組發(fā)現(xiàn)鼻咽癌細胞中存在脂肪滴堆積現(xiàn)象，提示鼻咽癌細胞中的脂肪酸代謝可能存在異常，并參與鼻咽癌的發(fā)生與發(fā)展。脂肪酸代謝改變與腫瘤的關系尚未闡明。目前鼻咽癌脂肪酸代謝及其相關基因改變的文獻報道非常有限。
　　目的:篩選出鼻咽癌中異常表達的脂肪酸代謝相關基因并進一步研究其對鼻咽癌惡性生物行為的影響極其可能的分子機制。
　　研究方法:
　　1.通過對NCBI下屬的

3、GEO數(shù)據(jù)庫中兩組鼻咽癌表達譜芯片數(shù)據(jù)進行生物信息學分析，篩選出鼻咽癌中與脂肪酸代謝相關的差異基因。
　　2.利用TCGA數(shù)據(jù)庫，分析ACAA1基因在人類多種腫瘤中的表達改變。
　　3.通過熒光定量PCR、Western blot法及免疫組織化學染色法驗證ACAA1在鼻咽癌中的轉錄和表達情況。
　　4.構建穩(wěn)定過表達ACAA1的鼻咽癌細胞系，通過繪制生長曲線、克隆形成實驗、細胞遷移試驗以及體外細胞侵襲實驗來檢測ACAA

4、1基因在鼻咽癌細胞中的腫瘤生物學功能。
　　5.利用Western blot方法檢測PTEN、Akt/pAkt以及上皮-間質轉化相關因子Snail、MMP9、MMP2、E-cadherin的表達情況，并進一步利用PTEN抑制劑phen處理過表達ACAA1的鼻咽癌細胞，檢測ACAA1是否通過PTEN/Akt信號傳導通路影響鼻咽癌細胞的轉移。
　　研究結果:
　　1.發(fā)現(xiàn)脂肪酸代謝相關基因ACAA1在鼻咽癌和10種腫瘤中低

5、表達生物信息學分析發(fā)現(xiàn)脂肪酸代謝相關基因ACAA1在鼻咽癌和頭頸部鱗狀細胞癌、肺癌、肝癌等10種惡性中低表達;進一步通過實時熒光定量PCR和免疫組織化學染色法驗證了ACAA1在鼻咽癌中轉錄和表達的下調(diào)，進一步驗證了生物信息學分析結果的可靠性。
　　2.ACAA1抑制鼻咽癌細胞的惡性生物學行為
　　ACAA1可抑制鼻咽癌細胞的增殖、克隆形成、細胞遷移以及侵襲能力。
　　提示ACAA1抑制鼻咽癌細胞的惡性生物學行為

6、　　3.ACAA1抑制鼻咽癌細胞的上皮間-質轉化
　　轉染ACAA1基因的鼻咽癌上皮細胞中Snail、MMP9、MMP2表達下調(diào)，而E-cadherin表達上調(diào)，提示ACAA1抑制鼻咽癌細胞的上皮間-質轉化。
　　4.ACAA1通過PTEN/Akt/EMT途徑抑制鼻咽癌細胞的轉移
　　過表達ACAA1的鼻咽癌細胞中PTEN表達增高，而且Akt的磷酸化水平下降;PTEN抑制劑phen處理可促進過表達ACAA1鼻咽癌細胞的