三氟柳及其配合物抑制血小板聚集和誘導肝癌細胞凋亡的研究.pdf

1、背景：臨床上用于心腦血管疾病的預防與治療藥物—阿司匹林，不僅作為抗血小板聚集的經典藥物，又具有降低結腸癌，食管癌，肺癌，宮頸癌，乳腺癌，肝癌，皮膚癌等癌癥的風險。但阿司匹林在用于癌癥預防的過程中所引起的如胃腸道出血限制了其進一步應用。三氟柳，乙酰水楊酸結構類似物，亦具有抗血小板聚集作用，并應用于缺血性中風，腦梗塞，短暫缺血性發(fā)作等疾病的臨床治療，對比阿司匹林大大降低出血性風險。銅作為胞內的必需金屬元素，其潛在的氧化還原活性使得銅參與了胞

2、內眾多生化過程。銅的失衡與癌癥、神經退行性病變等許多疾病的發(fā)生有關，最近的研究發(fā)現(xiàn)銅的配合物可以作為蛋白酶體的抑制劑和凋亡誘導因子以用于癌癥的預防與治療。目前鮮有三氟柳及其配合物作用于腫瘤的報道。
　　目的：1.檢測三氟柳及其金屬離子配合物zhr-315的血小板聚集抑制作用;2.探究三氟柳及zhr-315對肝癌細胞株HepG2和Bel7402增殖抑制作用;3.觀察三氟柳及zhr-315作用于細胞后形態(tài)的變化;4.比較三氟柳及zhr

3、-315誘導HepG2和Bel7402凋亡的能力;5.探究三氟柳和zhr-315引起HepG2和Bel7402凋亡的分子機制，為三氟柳及其配合物的抗癌作用提供新的證據。
　　方法：1.采用體外實驗的方法，制備富血小板血漿，測定三氟柳和zhr-315對大鼠血小板聚集的抑制作用;2.MTT法檢測兩種藥物對肝癌細胞株HepG2和Be l7402的細胞增殖抑制作用;3.倒置光學顯微鏡觀察藥物作用后細胞形態(tài)的變化;4.Hoechst3325

4、8比較兩種藥物誘導細胞凋亡的能力;5.Western blot研究三氟柳和zhr-315引起細胞凋亡的分子機制
　　結果：1.三氟柳及zhr-315對于由ADP誘導的大鼠血小板聚集均有抑制作用，其IC50分別是1.764mM和0.513mM;2.三氟柳和zhr-315對HepG2和Bel7402細胞均抑制增殖，且在一定濃度范圍內呈現(xiàn)時間和劑量依賴關系;其IC50值，三氟柳對HepG2和Bel7402細胞分別是:0.933±0.02

5、1 mM，0.716±0.141mM;zhr-315對HepG2和Bel7402細胞分別是:0.175±0.039mM，0.137±0.044mM;3.藥物作用后細胞形態(tài)發(fā)生變化，胞質皺縮，內容物增多;4.相同濃度下對于同種細胞zhr-315較三氟柳具有更強的引起細胞凋亡的能力，HepG2中，0.45、0.93mM濃度下，zhr-315均誘導細胞凋亡，但并未發(fā)現(xiàn)三氟柳在此濃度下誘導細胞凋亡;0.36、0.72mM濃度時，zhr-315均

6、能誘導Bel7402細胞凋亡，三氟柳卻不能引起細胞的凋亡;5.三氟柳和zhr-315作用于細胞后，WB檢測到caspase3，caspase9和PARP的斷裂帶，即藥物通過內源性通路引起細胞凋亡，且與藥物作用濃度呈一定的相關性;6.三氟柳和zhr-315作用于細胞后，WB檢測到抗凋亡蛋白Bcl-2，Bcl-xl的降低，促凋亡蛋白Bax的升高，并與藥物作用濃度相關。
　　結論：1.三氟柳及zhr-315對于血小板聚集具有抑制作用;2