組蛋白去乙?；种苿═SA）影響體細胞克隆胚早期發(fā)育過程的初步研究.pdf

1、目前，核移植效率的低下和克隆動物發(fā)育成功率低是影響體細胞克隆技術廣泛應用的主要瓶頸。研究認為，產生這些問題的主要原因是供體核染色質與受體卵質之間互作異常、影響體細胞染色質解聚和激活表達程序出現紊亂有關。本試驗采用組蛋白去乙?；柑禺愋砸种苿㏕SA(trychostatin A)能夠抑制重構胚早期組蛋自去乙?；淖饔锰攸c，對重構胚發(fā)育早期的不同階段進行TSA處理,觀察其對重構胚發(fā)育狀況的影響，以揭示組蛋白乙?；苋ヒ阴；饔迷诤藘热旧|重

2、編程過程中所發(fā)揮的作用，進而為闡釋重編程過程中后成記憶的修飾和固定機制提供重要依據,同時也試圖探尋一條能夠提高核移植效率的新途徑。 試驗一：TSA濃度對重構胚發(fā)育的影響。本試驗旨在選擇合適的TSA處理濃度,按照實驗設計分成四組不同的TSA濃度，分別為0.5nM、5nM、50nM、500nM，處理時間為1Ch。結果發(fā)現,50nM的TSA濃度的囊胚率(23.96％)要顯著高于其他三組(11.76％、14.29％、8.57％)和對照組

3、(11.94％)，它們之間差異顯著(P＜0.05)，說明50nMTSA可以在最小程度傷害重構胚的情況下最大限度的實現對組蛋白去乙?；?HDAC)的抑制，促進組蛋白的乙?；?，從而達到明顯提高重構胚發(fā)育的目的。 試驗二：融合階段組蛋白乙?；苋ヒ阴；瘜χ貥嬇甙l(fā)育的影響。本試驗旨在確定融合階段組蛋白乙?；苋ヒ阴；瘜χ貥嬇叩暮顺绦蛑嘏偶捌浒l(fā)育效果的影響作用。設計了兩組試驗，分別為T3K6組和K3K6組。結果顯示，K3K6組與T3K6

4、組在二細胞率(81.82％vs83.18％)和囊胚率(18.19％vs21.45％)，兩個指標差異均不顯著(P＞0.05)。說明在融合階段通過抑制組蛋白去乙?；饔貌⒉荒茱@著改善重構胚的發(fā)育狀況，對重構胚的核程序重排并沒有直接的作用。 試驗三：激活階段組蛋白乙酰化＼去乙?；瘜χ貥嬇甙l(fā)育的影響，本試驗旨在確定在激活階段組蛋白乙酰化＼去乙?；瘜χ貥嬇叩暮顺绦蛑嘏偶捌浒l(fā)育效果的影響。試驗設計了三組，分別為K3T 6組、K3K6組和T3

5、T6組。結果顯示，K3T6和T3T6組的二細胞率(90.52％，91.04％)和囊胚率(29.31％，32.54％)都明顯高于K3K6組(80.41％，21.65％)。兩者之間差異顯著(P＜0.05)：而K3T6組和T3T6組之間在二細胞率(90.52％vs91.04％)和囊胚率(29.31％vs32.54％)上的差異則不顯著(p＞0.05)。說明在激活階段通過抑制組蛋白的去乙?；饔每梢悦黠@提高重構胚的發(fā)育效率。試驗四：延長激活時間和

6、激活階段TSA處理的時間對重構胚發(fā)育的影響。本試驗旨在觀察不同的激活時間及不同的TSA處理時間是否會對重構胚發(fā)育產生影響。共設計四組試驗，分別為K2K6組、K2K9組、T2T6組和T2T9組。結果顯示，K2K6組和K2K9組在二細胞率(83.51％vs86.89％)及囊胚率(18.56％vs19.67％)上的差異并不顯著(P＞0.05)；T2T6組和T2T9組之間在二細胞率(87.38％vs88.34％)和囊胚率(31.06％vs34.

7、19％)的發(fā)育上的差異也不顯著(P＞0.05)。說明延長激活時間和在激活階段延長TSA的處理時間并不能顯著提高重構胚的發(fā)育狀況。 結論：(1)在用TSA處理重構胚時，其濃度以50nM為宜。(2)在重構胚的融合階段，TSA的處理并沒有對重構胚的發(fā)育狀況產生顯著的影響作用，說明在融合階段組蛋白的脫乙酰化作用對重構胚的發(fā)育沒有影響。(3)在重構胚的激活階段，通過TSA的處理可以顯著提高重構胚的發(fā)育效率，說明該階段重構胚的激活與TSA誘