Lin28B-let-7信號通路參與胰腺癌化療藥物耐藥性的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文研究目的是通過靶向調控 Lin28B/let-7基因信號通路,進一步證實Lin28B/let-7之間相互作用的分子機制及其與胰腺癌化療耐藥性的關系,探討調控Lin28B/let-7通路改變胰腺癌化療耐藥性的可能性。方法是實驗主要包括胰腺癌AsPC-1細胞的傳代培養(yǎng)、western blotting實驗、質粒轉染技術實驗、實時熒光定量PCR技術實驗以及MTS細胞活力實驗。實驗大概內容:首先構建過表達Lin28B質粒pCMV6-Lin2

2、8B,基因沉默質粒pGFP-shLin28B以及對應的空白質粒,并分別以相同的條件根據質粒轉染技術轉染至AsPC-1細胞,western blotting實驗檢測轉染后細胞體內Lin28B蛋白表達量用以判定質粒轉染是否成功。其次,提取不同轉染后的胰腺癌細胞內的總RNA,利用實時熒光定量PCR技術檢測Let-7 miRNA,Lin28B mRNA的表達量情況。最后,不同質粒轉染的癌細胞與預先設定不同濃度的吉西他濱藥物溶液在相同條件下孵育一

3、段時間,MTS細胞活力檢測實驗測定不同處理的細胞對吉西他濱藥物的耐受性。結果是Western blotting實驗結果表明,胰腺癌細胞中轉染高表達質粒的細胞比轉染基因沉默質粒的細胞中Lin28B表達量顯著性增加,實時熒光定量PCR結果顯示不同質粒轉染的細胞體內let-7 miRNA家族表達水平有顯著性差異,同樣Lin28BmRNA也有顯著性不同。MTS細胞活力檢測數據表示AsPC-1癌細胞體內Lin28B,let-7分子量的不同,導致胰

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