洋蔥伯克氏菌WZ1對二氯喹啉酸脅迫的應激反應及其降解機制研究.pdf

1、浙江大學生命科學學院碩士學位論文洋蔥伯克氏菌WZ1對二氯喹啉酸脅迫的應激反應及其降解機制研究姓名：李子木申請學位級別：碩士專業(yè)：微生物學指導教師：閔航20080501摘要會對菌株WZl造成傷害。而菌株WZl則通過分泌熱激蛋白70、超氧化物岐化酶、CutAl二價離子耐受蛋白、DNA錯配修復蛋白MutS等具保護功能和解毒能力的蛋白質來緩解二氯喹啉酸造成的損害。二氯喹啉酸脅迫下還有多種ABC轉運蛋白被誘導表達，這可能與菌株WZl轉運二氯喹啉酸

2、代謝產物或細胞內其他毒害物質的過程有關。4通過雙向電泳實驗，還鑒定到了可能參與二氯喹啉酸代謝過程的2個關鍵酶——鄰苯二甲酸雙加氧酶(PDR)和氯鄰苯二酚1，2雙加氧酶(12CCD)。用傳統(tǒng)酶活檢測方法測定了這2種酶在含二氯喹啉酸的培養(yǎng)液中菌株不同培養(yǎng)階段的酶活比，發(fā)現這2種酶的酶活變化與菌株WZl利用二氯喹啉酸的生長情況相符，證明菌株利用二氯喹啉酸的能力與這2種酶的酶活密切相關。通過GCMS檢測到3種可能的二氯喹啉酸中間代謝產物，結合降

3、解過程中的關鍵酶，初步推測二氯喹啉酸的降解途徑為：菌株WZl首先通過脫羧作用將3，7二氯喹啉酸轉化為3，7二氯喹啉，經氧化裂解后打開含氮的環(huán)，再經過基團轉移等作用轉化為2甲酸5氯苯胺，轉氨作用后形成氯化鄰苯二甲酸，然后經過上述測得的鄰苯二甲酸雙加氧酶和氯鄰苯二酚1，2雙加氧酶作用后最終進入三羧酸循環(huán)。5利用Northern雜交和RTPCR進一步檢測二氯喹啉酸的降解關鍵酶——氯鄰苯二酚1，2雙加氧酶。通過設計該酶的引物從菌株WZl的基因組

4、中擴增到了氯鄰苯二酚1，2雙加氧酶的部分基因片段。用該基因片段制備探針后進行Northern雜交，結果證明了該酶的確系由二氯喹啉酸誘導表達。此外，還將該菌株的RNA反轉錄為cDNA，進行了該酶的cDNA擴增，擴增結果與在菌株WZl基因組上的擴增結果一致。兩個實驗從不同的角度在RNA表達水平上證明了菌株WZl的氯鄰苯二酚1，2雙加氧酶由二氯喹啉酸誘導產生，并在二氯喹啉酸的降解過程中發(fā)揮著重要作用。關鍵詞：洋蔥伯克氏菌WZl；二氯喹啉酸；雙