索拉非尼對(duì)裸鼠高轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞移植瘤microRNAs表達(dá)的影響及其意義.pdf

1、目的:觀察索拉非尼對(duì)裸鼠移植瘤生長(zhǎng)情況的影響并檢測(cè)腫瘤組織miRNA的表達(dá)變化，分析討論miRNA在索拉非尼抑制癌細(xì)胞增殖、抗血管形成及促上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial to mesenchymal transitnio，EMT）發(fā)生等過(guò)程中的調(diào)控作用。
　　方法:
　　1、建立裸鼠腹腔移植瘤模型:
　　選擇高轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細(xì)胞株MHCC-97H建立裸鼠皮下荷瘤模型，待荷瘤長(zhǎng)至約1.5cm3，處死荷瘤裸鼠，取出腫瘤

2、組織，將瘤塊剪成3mm直徑小塊供實(shí)驗(yàn)用。實(shí)驗(yàn)裸鼠分A組（實(shí)驗(yàn)組）和B組（對(duì)照組），每組6只，將預(yù)先處理好的實(shí)驗(yàn)用瘤組織各1塊埋入裸鼠腹腔建立裸鼠腹腔移植瘤模型。術(shù)后A組裸鼠每日索拉非尼30mg/kg(0.2ml)灌胃，日1次，B組給予等體積的溶劑，35天后處死所有裸鼠，取材。
　　2、對(duì)比索拉非尼治療組及對(duì)照組腫瘤的大小，免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)兩組腫瘤組織微血管密度（microvessel density，MVD）、內(nèi)源性缺氧標(biāo)記

3、物HIF-1α(Hypoxia-inducible factor-1α)、E-鈣粘素(E-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)的表達(dá)變化。
　　3、利用基因芯片技術(shù)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組miRNA表達(dá)情況，并對(duì)其結(jié)果進(jìn)行生物信息學(xué)分析。Gene Ontology(GO)用來(lái)分析靶基因的分子功能。靶基因的顯著性信號(hào)通路利用Kyoto Encyclopedia of Genes andGenomes(KEGG)進(jìn)行分析。

4、>　　4、通過(guò)生物信息學(xué)結(jié)果，分析并討論miRNA在索拉非尼抑制癌細(xì)胞增殖、抗血管形成及促使EMT發(fā)生等過(guò)程所起的調(diào)控作用。
　　結(jié)果:
　　1、A、B兩組裸鼠腹腔成瘤率均為100％，實(shí)驗(yàn)期間兩組裸鼠均無(wú)死亡，未見(jiàn)明顯肉眼轉(zhuǎn)移。
　　2、實(shí)驗(yàn)組裸鼠腫瘤體積明顯小于對(duì)照組，MVD表達(dá)量明顯低于對(duì)照組，上述差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)組HIF-1α表達(dá)量高于對(duì)照組，兩組比較具備統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);與對(duì)照

5、組相比，實(shí)驗(yàn)組E-cadherin的表達(dá)明顯下調(diào)，而Vimentin表達(dá)上調(diào)，兩組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，提示索拉非尼促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生。
　　3、基因芯片分析miRNA表達(dá)譜的差異發(fā)現(xiàn)28個(gè)miRNAs在實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組中差異表達(dá)，上調(diào)的miRNAs有20個(gè)，下調(diào)的miRNAs有8個(gè)。通過(guò)生物信息學(xué)分析結(jié)果判斷:miR-762、miR-150-5p明顯上調(diào)，參與調(diào)控索拉非尼抑制肝癌細(xì)胞增殖;miR-142a-3p雖

6、然上調(diào)不明顯，但參與調(diào)控多個(gè)與腫瘤血管形成相關(guān)的生物學(xué)過(guò)程;上調(diào)的miR-155-5p及下調(diào)的miR-122-5p參與EMT的發(fā)生。
　　結(jié)論:
　　1、索拉非尼具有抑制腫瘤生長(zhǎng)及抗血管形成的雙重作用;并致腫瘤組織缺氧，誘導(dǎo)腫瘤上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生。
　　2、miR-762、miR-150-5p參與調(diào)控索拉非尼抑制肝癌細(xì)胞增殖的過(guò)程，miR-142a-3p參與調(diào)控抗腫瘤血管形成過(guò)程。
　　3、miR-155-5p及