雷帕霉素對大鼠視網膜缺血再灌注所致視網膜損傷中基質金屬蛋白MMP-9表達的影響.pdf

1、目的:探討雷帕霉素對視網膜缺血再灌注所致視網膜損傷的保護作用和機制，及其保護效果是否通過降低基質金屬蛋白MMP-9的表達來實現(xiàn)。
　　方法:按隨機分組的原則將81只健康雄性Wistar大鼠隨機分為3組:空白對照組、實驗對照組、實驗組，每組27只。所有大鼠均取右眼為實驗對象。實驗對照組和實驗組行前房灌注，建立視網膜缺血再灌注(retinal ischemia-reperfusion，RIR)模型。實驗組在前房灌注前2h按2mg/kg

2、的劑量腹腔注射雷帕霉素。實驗對照組大鼠腹腔注射等量的生理鹽水和二甲基亞砜(Dimethyl sulfoxide，DMSO)。分別在灌注前，灌注后0h、6h、12h、24h、48h取視網膜標本，HE染色光鏡觀察視網膜組織變化;提取total RNA并進行熒光定量實時PCR(quantitative Real time PCR，qRT-PCR)，檢測三組中MMP-9 mRNA不同時間點，在視網膜組織上的表達水平的變化;進一步應用Wester

3、n Blotting法檢測大鼠視網膜缺血再灌注損傷后，MMP-9蛋白質表達水平的變化。
　　結果:(1)HE染色顯示視網膜缺血再灌注后早期，視網膜內層水腫增厚，晚期視網膜神經節(jié)細胞數(shù)目減少及視神經纖維層萎縮變薄。雷帕霉素治療組組織變化趨勢與缺血組相似，細胞數(shù)目減少及視網膜厚度變薄的程度均較缺血組有明顯改善。(2) MMP-9的表達自再灌注后6小時開始增加，24小時后達到高峰(mRNA和蛋白質的相對含量分別為7.6±0.16和5.6