降粘膠囊指紋圖譜分析及藥效學(xué)研究.pdf

1、目的:以降粘膠囊制劑為研究對(duì)象，建立HPLC指紋圖譜及多成分含量測(cè)定分析方法，從定性定量的角度全面的控制其內(nèi)在質(zhì)量，對(duì)降粘膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行提升;建立動(dòng)物病理模型，對(duì)降粘膠囊進(jìn)行抗血栓藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，改善微循環(huán)障礙實(shí)驗(yàn);為該制劑臨床用藥提供依據(jù)。
　　方法:(1)采用HPLC法，優(yōu)化提取方法及色譜條件，選用AgilentC-18(4.6mm×250 mm，5μ m)色譜柱，以乙腈-0.05％磷酸水為流動(dòng)相，梯度洗脫，柱溫25℃，流速1m

2、L·min-1，進(jìn)樣量10μ L，波長(zhǎng)272nm;建立指紋圖譜方法。運(yùn)用國(guó)家藥典委員會(huì)“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件A版”評(píng)價(jià)10批不同批次降粘膠囊指紋相似度，采用對(duì)照品比對(duì)法、制劑和藥材相關(guān)性分析法，對(duì)復(fù)發(fā)制劑指紋中指紋峰進(jìn)行藥材歸屬。(2)對(duì)降粘膠囊進(jìn)行含量測(cè)定研究，以葛根素、丹參酮HA、柚皮苷為指標(biāo)性成分，建立HPLC方法，對(duì)3種成分含量進(jìn)行同時(shí)測(cè)定。（3)采用小鼠腹腔注射角叉菜膠，建立小鼠尾部血栓模型，通過(guò)不同給藥組血栓長(zhǎng)

3、度比較，考察降粘膠囊對(duì)體內(nèi)血栓形成的影響;采用局部滴加50ug·mL-1的鹽酸異丙腎上腺素溶液0.5mL，建立大鼠腸系膜微循環(huán)障礙模型，通過(guò)BI-2000型微循環(huán)觀測(cè)系統(tǒng),觀察腎上腺素滴注前后不同時(shí)間點(diǎn)內(nèi)、不同組間降粘膠囊對(duì)大鼠腸系微血管管徑、血液流及血液流速態(tài)的影響。
　　結(jié)果:(1)建立了降粘膠囊HPLC指紋圖譜，不同批次10批降粘膠囊制劑相似度在0.97～0.99之間，該方法有較好的精密度及準(zhǔn)確度，符合指紋圖譜要求。以葛根素

4、為參照峰，標(biāo)記了28個(gè)共有峰，4個(gè)成分得已鑒定，其中8號(hào)為葛根素，23號(hào)為甘草酸，24號(hào)為甘草苷，28號(hào)為丹參酮HA。對(duì)降粘膠囊指紋共有峰進(jìn)行了藥材歸屬分析，23個(gè)峰歸屬到具體藥材。(2)優(yōu)化建立了HPLC法同時(shí)測(cè)定葛根素、丹參酮HA、柚皮苷3個(gè)主要指標(biāo)成分同時(shí)含量測(cè)定的方法，其精密度、穩(wěn)定性符合要求，重復(fù)性好，葛根素在0.1041～0.7286mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系;柚皮苷在0.1040～0.7280mg·mL-1范圍內(nèi)呈

5、良好線性關(guān)系;丹參酮HA在4.6968～12.5248ug·mL-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系;回收率試驗(yàn)結(jié)果表明:均符合標(biāo)準(zhǔn)，RSD均＜3％。三批降粘膠囊平均含量分別為:葛根素的8.0255mg·g-1、柚皮苷14.4624mg·g-1、丹參酮HA156.6844ug·g-1。(3)建立了小鼠尾部血栓模型，試驗(yàn)結(jié)果表明:降粘膠囊各劑量組均能不同程度抑制對(duì)角叉菜膠所致小鼠尾靜脈體內(nèi)血栓的形成;降粘膠囊能不同程度的改善腎上腺素所致大鼠腸系膜微循

6、環(huán)障礙;給藥組與生理鹽水組比較(p＜0.05)，均有顯著性差異。
　　結(jié)論:(1)研究建立的降粘膠囊指紋圖譜分析方及多成分含量方法法簡(jiǎn)便，穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于降粘膠囊的質(zhì)量控制;丹參、葛根、枳殼等藥材的化學(xué)成分信息對(duì)降粘膠囊指紋圖譜的貢獻(xiàn)較大，部分藥材在指紋中未得到體現(xiàn)。(2)抗血栓實(shí)驗(yàn)表明，腹腔注射角叉菜膠能準(zhǔn)確的復(fù)制小鼠尾部血栓模型，降粘膠囊具有抑制改善血栓的作用;微循環(huán)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:通過(guò)觀察大鼠腸系膜微血管管