利魯唑在脂多糖誘導眼內炎癥中的干預研究.pdf

1、眼外傷、內眼手術是感染性眼內炎的主要原因，多為細菌進入眼內導致感染所致，如凝固酶陰性葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌、革蘭氏陰性細菌等。細菌性眼內炎是嚴重威脅視力的眼科急癥，細菌性眼內炎預后受細菌數量、毒力、患者年齡及免疫狀態(tài)等多種因素影響。雖然及時采取抗生素藥物治療、玻璃體切除術等治療，但是視力預后仍不理想，常導致嚴重的視功能損害。細菌在增殖、破裂的過程中釋放的毒性物質（內毒素、外毒素）可誘發(fā)嚴重的炎癥反應及細胞壞死[1,2,3]。其

2、中細菌的裂解產物是誘發(fā)眼內炎癥的重要因素之一。脂多糖是革蘭陰性桿菌細胞壁的主要成分，也是其主要毒性致病因子，可用于玻璃體腔注射，誘導感染性眼內炎癥反應[4]。炎癥反應導致血眼屏障破壞，炎性細胞向組織間隙遷移浸潤，蛋白滲漏，精密的視網膜結構被破壞，最終導致功能不同程度的喪失。如何消除眼內炎中眼內組織破壞、改善最終視力預后一直是我們面臨的難題和挑戰(zhàn)。在積極抗菌治療的同時，能否有效并及時地控制眼內炎癥反應是治療的關鍵，也是預后的決定性因素。<

3、br>　　利魯唑（Riluzole）屬于苯并噻唑類衍生物，1996年開始作為一種新型谷氨酸釋放抑制劑被批準應用于肌萎縮性脊髓側索硬化癥(amyotrophic lateral sclerosis，ALS)的治療，其穩(wěn)定細胞內外離子濃度的作用使其在神經保護、抗驚厥、抗抑郁等方面具有廣泛的作用，提示其在更多疾病中的臨床應用價值。根據其藥理機制，我們推測其可能在眼內炎癥控制中起到積極作用。本研究擬觀察利魯唑對脂多糖誘導大鼠眼內炎癥的干預作用，

4、并對其機制進行初步研究。
　　目的：
　　通過玻璃體腔注射大腸桿菌脂多糖(LPS,lipopolysaccharide from Escherichia coli)建立大鼠眼內炎模型，觀察其炎癥表現、組織病理學特征以及利魯唑的干預作用，然后對其作用機制進行研究，為眼內炎的治療提供新線索。
　　材料與方法：
　　將Sprague-Dawley（SD）大鼠隨機分為3組，1組：生理鹽水對照組；2組：眼內炎組；3組：眼內

5、炎利魯唑干預組。生理鹽水組大鼠右眼注入5μl無菌生理鹽水。2、3組大鼠右眼玻璃體腔內注入LPS(2μg,5μl)，建立LPS誘導的眼內炎模型。左眼為正常對照眼。利魯唑干預組在LPS注射前12 h和術中及術后連續(xù)3 d腹腔內注射利魯唑注射液(0.1％,10mg/kg)。
　　第一部分：造模后6h、12h、24h、48h、3d、5d、7d進行眼部炎癥評分，病理組織學檢查觀察炎癥細胞浸潤，行免疫組化測定谷氨酰胺合成酶（glutamine

6、 synthetase，GS）在視網膜組織的表達變化及分布，采用熒光定量聚合酶鏈反應（RT-PCR）技術檢測視網膜組織中GS的表達情況，觀察利魯唑的干預作用。第二部分：對利魯唑的干預機制進行初步探討，分光光度計法測定玻璃體中谷氨酸（glutamate，Glu）含量，采用TUNEL法檢測視網膜組織細胞凋亡。
　　所有數據均用（x±s）表示，應用SPSS21.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學處理，采用單因素方差分析進行組間比較，采用LSD檢驗進

7、行兩兩比較，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1.臨床炎癥評分
　　玻璃體腔內注射LPS誘導出典型眼內炎臨床表現，造模后干預組炎癥反應明顯較2組輕，造模后24 h、48h、3d時間點兩組臨床炎癥評分間差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05)。1組未見明顯炎癥反應。
　　2.病理組織學檢查
　　常規(guī)HE染色后顯微鏡下觀察白細胞浸潤，對切片中以鋸齒緣為前界的玻璃體腔中的中性粒細胞、淋巴細胞、單核-巨噬

8、細胞等炎癥細胞進行計數分析。2組、3組在造模后均可觀察到大量外周血白細胞眼內的浸潤。HE染色顯示各時間點3組玻璃體內炎癥細胞計數低于2組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。而Ⅰ組造模后玻璃體腔、視網膜大部分未見、或散在少量的炎癥細胞浸潤，視網膜形態(tài)基本正常，結構清晰。
　　與1組相比，GS在眼內炎組的表達升高，主要表達于內顆粒層、神經節(jié)細胞層Müller細胞胞漿中。2組、3組在6h、12h、24h、48h、3dGS的表達具有顯著性

9、差異(P＜0.05)，3組GS的表達明顯低于2組，但仍高于對照組。
　　3.實時熒光定量PCR方法檢測視網膜組織GS的表達
　　48h時，對照組視網膜中檢測到低水平表達，眼內炎組GSmRNA表達較對照組明顯增強（P<0.05），利魯唑干預組GSmRNA表達較眼內炎組降低（P<0.05），但仍高于對照組。
　　4.谷氨酸濃度
　　2組和3組大鼠玻璃體中谷氨酸含量在炎癥初期就開始升高，48h時達到高峰，分別為324.

10、01±2.47μmol/l、253.95±10.76μmol/l。2組在5d時谷氨酸濃度較之前出現小幅回升（298.04±4.83μmol/l），然后逐漸下降。6h后各時間點，3組造模眼玻璃體谷氨酸濃度明顯低于2組，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，但仍明顯高于1組。
　　5. LPS誘導眼內炎后，TUNEL染色陽性細胞散在分布于視網膜神經節(jié)細胞層、內顆粒層，3d時出現凋亡細胞數量明顯增多。2組細胞凋亡數目明顯多于3組。生理鹽水

11、對照組視網膜未見明顯細胞凋亡，6h，12h，24h時眼內炎組與干預組相比細胞凋亡程度無明顯差異，其后各時間點3組凋亡細胞指數均低于同期眼內炎組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結論：
　　利魯唑可以抑制內毒素誘導的眼內炎中炎癥細胞的眼內浸潤，減少組織損害，其機制可能是通過減少視網膜組織細胞凋亡，使玻璃體谷氨酸含量降低，抑制 Müller細胞活化。該研究結果提示利魯唑在細菌性眼內炎中的保護作用，為眼內炎的輔助治療提供依