靈芝三萜單體化合物對鵝膏毒肽中毒小鼠的治療作用及其機理研究.pdf

1、我國的食物中毒死亡事件主要是由毒蘑菇中毒引起的。作為有效的解毒劑，靈芝煎劑已在臨床上用于治療鵝膏菌引起的中毒。作為靈芝的主要藥效成分之一，靈芝三萜被證實具有多種藥理作用。本文探討了5種靈芝三萜單體化合物、靈芝總三萜(GLTT)和對照藥物水飛薊賓對α-鵝膏毒肽(α-AMA)中毒小鼠的治療作用及其機理，獲得了以下結果:
　　1.靈芝總三萜的提取、分離純化:以靈芝子實體粉末∶無水乙醇=1∶20的比例，80C水浴浸提4個小時，重復該過程3

2、次，得粗提液，濃縮后得浸膏，經大孔吸附樹脂(AB-8)吸附后梯度洗脫（首先用水洗，待流出液無色后，70％、90％乙醇梯度洗脫），收集洗脫液濃縮后凍干，得粗提物，萃取后，以不同比例(98∶2、96∶4、94∶6、92∶8、90∶10)的氯仿、甲醇為洗脫劑過硅膠柱繼續(xù)分離純化，收集氯仿∶甲醇=98∶2組分，濃縮，冷凍干燥后得到純度98％左右的靈芝總三萜(GLTT)，經HPLC分析表明至少含有18種以上的靈芝三萜單體化合物，其中含有靈芝酸A、

3、B、G和靈芝烯酸B。
　　2.靈芝三萜單體化合物及靈芝總三萜的體外抗氧化活性:分別采用DPPH自由基清除活性的測定、鐵離子螯合能力測定、還原力測定3種方法檢測了5種靈芝酸和靈芝總三萜的抗氧化活性，結果表明各物質均具有較強的抗氧化能力，其中靈芝酸C2的抗氧化能力最強，靈芝酸A的抗氧化能力最弱。
　　3.靈芝三萜單體對α-鵝膏毒肽中毒小鼠的治療作用:與正常組相比，中毒小鼠血清中的丙氨酸氨基轉移酶(ALT)和天冬氨酸氨基轉移酶(A

4、ST)活性顯著升高，引起嚴重肝損傷。經靈芝三萜單體、靈芝總三萜和水飛薊賓治療后，ALT、AST的活性顯著性降低，表明5種靈芝三萜單體化合物和靈芝總三萜具有水飛薊一樣的治療效果;不同劑量（5-40mg/kg/day）的靈芝酸C2均能明顯的降低中毒小鼠的血清ALT、AST活性，并且具有劑量正相關性，劑量為20 mg/kg/day時治療效果最顯著;靈芝總三萜、靈芝三萜單體和水飛薊賓治療后能降低致死劑量下中毒小鼠死亡率20-40％。
　　

5、4.靈芝三萜單體對α-鵝膏毒肽中毒小鼠抗氧化活性的影響:α-鵝膏毒肽中毒處理后，小鼠肝臟勻漿中超氧化物歧化酶(SOD)以及過氧化氫酶(CAT)的活性明顯降低，而丙二醛(MDA)的含量顯著的升高。靈芝三萜單體、靈芝總三萜和水飛薊賓治療后，能顯著的增加中毒小鼠的SOD和CAT酶活性，并顯著降低MDA的含量。不同劑量(5-40mg/kg/day)的靈芝酸C2均能大大增加中毒小鼠肝組織內的SOD和CAT酶活性，并顯著降低MDA的含量，并且具有劑

6、量正相關性，劑量為20 mg/kg/day時效果最顯著;這些結果表明靈芝三萜具有治療作用的機理之一是其具有抗氧化活性，能清除氧自由基，減少脂質的過氧化。
　　5.靈芝三萜單體對α-鵝膏毒肽中毒小鼠細胞凋亡的影響:α-鵝膏毒肽中毒小鼠的肝組織的DNA瓊脂糖凝膠電泳結果可以觀察到明顯的DNA梯形帶，而不同劑量(5，10，20，40mg/kg/day)靈芝酸C2給藥組沒有出現明顯的DNA梯形帶。α-鵝膏毒肽中毒小鼠肝組織中caspase