天津地區(qū)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤危險(xiǎn)因素相關(guān)基因多態(tài)性的研究.pdf

1、目的：顱內(nèi)動(dòng)脈瘤（Intracranial aneurysm，IA）破裂引起的自發(fā)性蛛網(wǎng)膜下腔出血（Subarachnoid hemorrhage）是神經(jīng)外科危重急癥之一。關(guān)于IA危險(xiǎn)因素的相關(guān)基因的研究很少有報(bào)道，本研究為探索糖尿病、高血壓等危險(xiǎn)因素相關(guān)的SNP位點(diǎn)的等位基因頻率和基因型頻率在天津漢族顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者與正常對(duì)照者中的分布情況；探討糖尿病、高血壓等危險(xiǎn)因素相關(guān)基因多態(tài)性與顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者之間的關(guān)聯(lián)性。
　　方法:

2、>　　1.研究對(duì)象
　　本研究總共376人作為研究對(duì)象，其中119個(gè)IA患者及257個(gè)對(duì)照人群，但是病例組有116個(gè)DNA提取和基因分型有效；對(duì)照組有效人數(shù)為251人。病例組為2013-2014年間天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院神經(jīng)外科病房收集的119名顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者，顱內(nèi)動(dòng)脈瘤均經(jīng)手術(shù)及數(shù)字減影血管成像和或CT血管成像確診為顱內(nèi)動(dòng)脈瘤。對(duì)照組受試者為257名本院體檢科體檢的健康漢族人群，所有受試者均無(wú)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤病史。本研究的22個(gè)基因的28

3、個(gè)SNP位點(diǎn)均為GWAS分析中與高血壓、糖尿病等危險(xiǎn)因素顯著關(guān)聯(lián)的位點(diǎn)（p﹤5×10–8）。
　　2.研究方法：記錄病房收治顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者和對(duì)照組一般臨床資料，制表并輸入數(shù)據(jù)至Excel中。使用全血基因組DNA提取試劑盒（北京百泰克生物技術(shù)有限公司）逐步提取外周血白細(xì)胞中全基因組 DNA。得到的基因組 DNA在Nanodrop ND-2000紫外分光光度計(jì)上測(cè)量濃度，在NCBI的dbSNP數(shù)據(jù)庫(kù)中下載本研究涉及的SNP位點(diǎn)的序列，

4、然后整理格式（采用 Assay Designer3．1， Sequenom引物設(shè)計(jì)軟件格式），設(shè)計(jì)引物，并用基因組DNA擴(kuò)增相應(yīng)片段。最后在生物公司中測(cè)序鑒定各個(gè)樣本SNP位點(diǎn)的基因型。
　　3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：使用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件的卡方檢驗(yàn)程序進(jìn)行等位基因頻率的統(tǒng)計(jì)，22個(gè)基因區(qū)域的28個(gè)SNP位點(diǎn)在病例組和對(duì)照組之間等位基因頻率差異比較用卡方檢驗(yàn)。計(jì)量資料用（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）表示，采用單因素分析對(duì)組間的均數(shù)進(jìn)行比較。P<0.05認(rèn)為

5、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)有差異的臨床危險(xiǎn)因素采用多因素Logist回歸模型分析。評(píng)估各危險(xiǎn)因素是否存在累積效應(yīng)。
　　結(jié)果:
　　本研究組共收集119名顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的患者，其中男性49名（41.2％），女性70名（58.8%），平均年齡為53.34±11.42歲。單因素分析，兩組間在年齡、高血脂、吸煙、飲酒上無(wú)顯著性差異（P>0.05）,在性別、高血壓、糖尿病以及心臟疾病中兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），經(jīng) Logist

6、ic回歸分析得出高血壓存在累積效應(yīng)（P=1.0×10-4;OR,2.500;95%CI,1.573-3.972）；119名患者中一共138個(gè)動(dòng)脈瘤，單發(fā)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的為103名患者，其中以位于頸內(nèi)動(dòng)脈的動(dòng)脈瘤最多為67個(gè)（48.6%），前循環(huán)次之34個(gè)（24.6%），形狀以囊性為主122個(gè)（88.4%）。其中動(dòng)脈瘤破裂的患者為82人，未破裂的為37人，在破裂和未破裂組之間高血壓和年齡差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但是Logistic回

7、歸分析未見累積效應(yīng)。對(duì)22個(gè)基因的28個(gè)SNP位點(diǎn)在病例和對(duì)照組間進(jìn)行等位基因頻率統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，位于TSLC2A9基因的rs7660895（P=0.007,OR,1.541;95%CI,1.126-2.110）和TOX基因上的rs11777927位點(diǎn)（P=0.013,OR,1.511;95%CI,1.088-2.098）與顱內(nèi)動(dòng)脈瘤相關(guān)。在 IA組其中12個(gè)人相互之間有血緣關(guān)系，相同家庭取一人加入分析，結(jié)果顯示 rs7660895(P

8、=0.001,OR,1.691;95%CI,1.226-2.332)位點(diǎn)和rs11777927(P=0.006,OR,1.587;95%CI,1.137-2.213)位點(diǎn)關(guān)聯(lián)性增強(qiáng)。為了探討TSLC2A9基因的rs7660895和TOX基因上的rs11777927位點(diǎn)在顱內(nèi)動(dòng)脈破裂和為破裂組是否存在差異，我們?cè)趦山M間進(jìn)行等位基因的統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)rs7660895(P=0.007, OR,2.196;95%CI,1.230-3.921)在兩