尿皮素Ⅱ對大鼠下丘腦室旁核小細胞分泌神經元活動的影響.pdf

1、目的：利用急性腦片全細胞膜片鉗記錄、神經藥理學和組織化學染色技術，研究尿皮素Ⅱ(UCNⅡ)對幼年大鼠PVN分泌型小細胞自發(fā)性放電和膜電位的影響機制。
　　方法：本研究使用生后為15-26天（Postnatal day15-26，P15-P26）的Wistar系大鼠，用異氟烷吸入麻醉后，迅速斷頭取腦，然后用振動切片機來制備含PVN的下丘腦切片，切片厚度為250微米。在室溫下(24-25℃)，將含有下丘腦室旁核的腦切片放置于人工腦脊液

2、(ACSF)中孵育60分鐘以上，對ACSF持續(xù)充有95％O2和5％ CO2混合氣體。ACSF的組成成分如下:118 mM NaCl，3 mM KCl，1 mM MgCl2.6H2O,1mM NaH2PO4.2H2O,25 mM NaHCO3,10 mM D-Glucose,2mM CaCl2。PH值為7.25-7.35，滲透壓為295-300 mOsM。記錄電極內灌裝7微升電極內液，內液組成成分如下:120mM potassium gl

3、uconate，10mMHEPES，1 mMEGTA，5mMKCl,3.5 mM MgCl2,4mM NaCl,8 mM biocytin,4 mM Na2ATP,0.2 mM Na2GTP。用KOH將pH值調為7.3。電極阻抗為5-7MΩ。PVN神經元電活動使用全細胞膜片鉗系統(tǒng)記錄，收集的數(shù)據(jù)存于電腦硬盤中，并將完整記錄而且基線相對穩(wěn)定的電生理數(shù)據(jù)用于最后的數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計學分析。電生理記錄完成后，將下丘腦片固定于4％多聚甲醛中24小時

4、以上，然后行DAB染色。在顯微鏡下，觀察神經元的位置和形態(tài)學特點并拍照獲取染色結果。電生理的實驗數(shù)據(jù)采用Clampfit10.4軟件進行分析，數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學分析采用的是SPSS軟件，用配對T檢驗來比較給藥前后的平均數(shù)，P＜0.05，記錄結果認為有統(tǒng)計學差異。
　　結果：
　　1.在電流鉗下（current-clamp recording mode），PVN小細胞分泌神經元對去極化電流刺激敏感，但沒有明顯內向整流電流、低閾值放電

5、(LTS)和超極化活化內向電流(Ih)。
　　2.在電流鉗下，UCNⅡ(100 nM)可導致34.7％的PVN小細胞分泌神經元的放電頻率明顯降低，沖洗20分鐘后恢復，UCNⅡ對自發(fā)性放電頻率的影響隨UCNⅡ濃度升高而減弱。
　　3.UCNⅡ抑制自發(fā)性放電的同時，導致膜電位的超極化，UCNⅡ導致的膜電位超極化對河豚毒素(TTX)不敏感。
　　4.在TTX存在條件下，UCNⅡ導致的PVN小細胞分泌神經元膜超極化具有劑量依存