尿皮素Ⅱ對大鼠下丘腦室旁核小細胞分泌神經元活動的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:利用急性腦片全細胞膜片鉗記錄、神經藥理學和組織化學染色技術,研究尿皮素Ⅱ(UCNⅡ)對幼年大鼠PVN分泌型小細胞自發(fā)性放電和膜電位的影響機制。
  方法:本研究使用生后為15-26天(Postnatal day15-26,P15-P26)的Wistar系大鼠,用異氟烷吸入麻醉后,迅速斷頭取腦,然后用振動切片機來制備含PVN的下丘腦切片,切片厚度為250微米。在室溫下(24-25℃),將含有下丘腦室旁核的腦切片放置于人工腦脊液

2、(ACSF)中孵育60分鐘以上,對ACSF持續(xù)充有95%O2和5% CO2混合氣體。ACSF的組成成分如下:118 mM NaCl,3 mM KCl,1 mM MgCl2.6H2O,1mM NaH2PO4.2H2O,25 mM NaHCO3,10 mM D-Glucose,2mM CaCl2。PH值為7.25-7.35,滲透壓為295-300 mOsM。記錄電極內灌裝7微升電極內液,內液組成成分如下:120mM potassium gl

3、uconate,10mMHEPES,1 mMEGTA,5mMKCl,3.5 mM MgCl2,4mM NaCl,8 mM biocytin,4 mM Na2ATP,0.2 mM Na2GTP。用KOH將pH值調為7.3。電極阻抗為5-7MΩ。PVN神經元電活動使用全細胞膜片鉗系統(tǒng)記錄,收集的數(shù)據(jù)存于電腦硬盤中,并將完整記錄而且基線相對穩(wěn)定的電生理數(shù)據(jù)用于最后的數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計學分析。電生理記錄完成后,將下丘腦片固定于4%多聚甲醛中24小時

4、以上,然后行DAB染色。在顯微鏡下,觀察神經元的位置和形態(tài)學特點并拍照獲取染色結果。電生理的實驗數(shù)據(jù)采用Clampfit10.4軟件進行分析,數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學分析采用的是SPSS軟件,用配對T檢驗來比較給藥前后的平均數(shù),P<0.05,記錄結果認為有統(tǒng)計學差異。
  結果:
  1.在電流鉗下(current-clamp recording mode),PVN小細胞分泌神經元對去極化電流刺激敏感,但沒有明顯內向整流電流、低閾值放電

5、(LTS)和超極化活化內向電流(Ih)。
  2.在電流鉗下,UCNⅡ(100 nM)可導致34.7%的PVN小細胞分泌神經元的放電頻率明顯降低,沖洗20分鐘后恢復,UCNⅡ對自發(fā)性放電頻率的影響隨UCNⅡ濃度升高而減弱。
  3.UCNⅡ抑制自發(fā)性放電的同時,導致膜電位的超極化,UCNⅡ導致的膜電位超極化對河豚毒素(TTX)不敏感。
  4.在TTX存在條件下,UCNⅡ導致的PVN小細胞分泌神經元膜超極化具有劑量依存

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