PrI-miR-218基因rs11134527多態(tài)性與肺癌易感性和放射敏感性.pdf

1、目的：
　　探究pri-miR-218基因rs11134527多態(tài)性與中國東北地區(qū)人群肺癌易感性，對符合條件的NSCLC患者行放療劑量達40Gy/20f時腫瘤退縮率之間關系的分析，為提高肺癌放射敏感性尋求新的研究思路。
　　方法：
　　按照病例對照研究方法的原則，病例組中符合條件者納入放射敏感性分析。研究對象為東北地區(qū)漢族人群，研究個體之間無血緣關系。經(jīng)研究者知情同意后，采集外周血，同時完成流行病學資料調(diào)查。病例組54

2、3例，均為有明確病理結果的原發(fā)性肺癌患者，來自中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院、中國醫(yī)科大學附屬第四醫(yī)院。具體的統(tǒng)計結果為:鱗狀細胞癌239例、腺癌210例、小細胞癌94例。對照組531例是來自沈陽軍區(qū)總醫(yī)院體檢的健康人群。所有標本于2009年9月至2015年5月收集。共納入符合條件行放射敏感性分析的患者136例（鱗狀細胞癌87例、腺癌49例）:①穿刺或細胞學病理診斷為NSCLC;②3D-CRT可測得放療前以及放療至40Gy/20f時的腫瘤體積

3、;③放射治療無中斷;④未行手術治療者;⑤放療前均行2周期化療，放療期間未行同步化療。均采用Siemens直線加速器的6MV-X線行3D-CRT體外照射。單次劑量為2Gy，達到40Gy后重新掃描CT。兩次CT掃描病人的擺位條件、參考中心相同。在計劃系統(tǒng)中進行兩次掃描CT的配準，參考配準圖像進行腫瘤靶區(qū)的勾畫。首次勾畫的腫瘤大體體積定義為GTV。重新勾畫的腫瘤大體體積命名為GTVs。TRR=(GTV-GTVs)/GTV×100％。
　

4、　以酚-氯仿法提取所采集標本的DNA，Taqman real-time PCR方法和SDS（美國應用生物系統(tǒng)公司）軟件程序進行基因分型。實驗室的質(zhì)量控制為在每個96孔檢測單元分別設立陰性對照和重復標本。每個SNP的信號強度應在兩個尺度上形成三個明顯的簇，且有顏色信號讀出。PCR反應體系如下:2X Taqman Master Mix2.5μl，20X引物與探針混合物0.125μi，H2O1.375μl，DNA1.00μl。PCR擴增條件:

5、首先95℃預變性10分鐘，然后92℃變性30秒，最后60℃退火和延伸1分鐘，總共47個循環(huán)。以SDS軟件Allelic Discrimination程序進行終點分析，判斷樣本的基因分型結果。
　　數(shù)據(jù)整理分析應用SPSS17.0軟件，以p＜0.05認為有統(tǒng)計學差異。應用x2檢驗比較相關危險因素的暴露、人口學特征、對照組中的HWE分布情況以及SNP基因型在病例與對照組二者之間的分布差異;以多因素logistic回歸計算比值比(odd

6、s ratio，OR)及95％可信區(qū)間(confidence interval，CI)。采用t檢驗比較腫瘤退縮率與性別、年齡、吸煙情況及腫瘤大小之間的關系，用方差分析比較腫瘤退縮率與分期及基兇多態(tài)性之間的關系。
　　結果：
　　對照組的基因型分布頻率經(jīng)x2檢驗，符合HWE(p=0.231，x2=1.436)。調(diào)整年齡、性別和吸煙狀態(tài)后，得出攜帶rs11134527位點G/G基因型和A/A基因型的患者與肺癌患病風險無相關性(p

7、=0.134，OR=0.699)。按病理類型分層分析，得出無論是在鱗癌、腺癌還是小細胞癌與對照組基因型相比均無統(tǒng)計學差異。Pri-miR-218 rs11134527的基因型A/A、A/G、G/G在136例可計算腫瘤退縮率患者中的分布頻率分別是39.0％、47.8％、13.2％。攜帶A/A基因型的患者腫瘤退縮率明顯高于A/G和G/G基因型(p=0.011)，合并A/G和G/G基因型后比較，差異更加明顯(p=0.004)。同時發(fā)現(xiàn)，吸煙組