七氟醚對(duì)哮喘小鼠氣道炎癥的影響及其作用機(jī)制研究.pdf

1、背景：哮喘是一種病因復(fù)雜的慢性氣道炎癥性疾病，其發(fā)病涉及到多種不同的炎性細(xì)胞以及細(xì)胞組分，主要臨床病理特征包括不同程度的氣道慢性炎癥，氣道高反應(yīng)性，粘液高分泌以及氣道重塑。七氟醚（SEV）是臨床常用的吸入麻醉藥，已報(bào)道七氟醚可以緩解哮喘危重患者的臨床癥狀，其確切機(jī)制尚待進(jìn)一步探討。水通道蛋白5（AQP5）主要表達(dá)于肺組織，是一類在維持肺組織水代謝平衡方面具有重要作用的通道蛋白。研究已表明，氣道的炎癥狀態(tài)能夠改變肺組織 AQP5的表達(dá)水平

2、。本研究擬以卵清蛋白（OVA）致敏和激發(fā)建立的急性哮喘小鼠為模型，研究七氟醚對(duì)哮喘小鼠氣道炎癥的影響及AQP5在其中的作用。
　　方法：
　　1.急性哮喘小鼠模型的建立取24只SPF級(jí)C57BL/6小鼠，雌性，體重23～27g，6～8周齡。采用隨機(jī)數(shù)字表法分成3組（n=8）：對(duì)照組、哮喘組以及七氟醚組。哮喘組于造模第0天開始致敏：10μg的卵清蛋白和1 mg的硫酸鋁鉀溶于0.5 ml的生理鹽水溶液中，注入小鼠腹腔。于造模第1

3、4天開始激發(fā)：采用超聲霧化儀連續(xù)7d重復(fù)吸入50 ml1％卵清蛋白生理鹽水溶液50 ml，每次吸入0.5h。七氟醚組造模方法同上，每次激發(fā)前吸入濃度為3%的七氟醚，吸入時(shí)間為1h。對(duì)照組于造模第0天腹腔內(nèi)注射0.5 ml含有硫酸鋁鉀1 mg的生理鹽水溶液，在第14天開始，連續(xù)7天重復(fù)霧化吸入0.9％生理鹽水50 ml，每天1次，每次0.5h。
　　2.氣道炎癥反應(yīng)的檢測(cè)于造模第21天即末次激發(fā)后24 h，行支氣管肺泡灌洗，回收灌洗

4、液，計(jì)數(shù)肺泡灌洗液（BALF）中炎性細(xì)胞總數(shù)，然后分類計(jì)數(shù)各種炎性細(xì)胞，采用ELISA法測(cè)定BALF中炎性介質(zhì)TNF-α、IL-13和IL-10濃度。取適量肺組織切片，HE染色，PAS染色，觀察肺組織炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)情況、支氣管上皮和肺泡結(jié)構(gòu)損傷情況，粘液分泌情況。
　　3.AQP5蛋白表達(dá)的檢測(cè)采用免疫組織化學(xué)法，Western blot方法檢測(cè)肺組織AQP5蛋白表達(dá)的水平。
　　結(jié)果：
　　1.急性哮喘小鼠模型的建立

5、。與對(duì)照組相比，哮喘組小鼠行為學(xué)上出現(xiàn)大小便增多，煩躁不安，呼吸急促等改變。組織病理學(xué)及分子生物檢測(cè)顯示，哮喘組小鼠肺組織中肺泡壁結(jié)構(gòu)被破壞，大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)在血管和支氣管周圍，氣管壁增厚明顯，上皮細(xì)胞壞死，粘液分泌增加；哮喘組小鼠BALF中的炎性細(xì)胞總數(shù)及各炎性細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)，白細(xì)胞介素13（IL-13），腫瘤壞死因子α（TNF-α）含量增加（P<0.05），白細(xì)胞介素10（IL-10）含量增加（P>0.05）。
　　2.七氟

6、醚抑制哮喘小鼠的氣道炎癥。與哮喘組小鼠相比，七氟醚組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)破壞明顯減輕，炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)數(shù)目及粘液分泌量明顯減少，BALF中炎性細(xì)胞總數(shù)及各炎性細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)明顯減少，細(xì)胞因子 TNF-α，IL-13表達(dá)水平降低，IL-10表達(dá)水平明顯增加（P<0.05）。
　　3.七氟醚上調(diào)哮喘小鼠的肺組織AQP5蛋白表達(dá)量。與對(duì)照組相比，哮喘組小鼠AQP5蛋白表達(dá)量顯著減少；與哮喘組相比，七氟醚組小鼠AQP5蛋白的表達(dá)量明顯增加（P<0