三七總皂苷對(duì)大鼠RIRI模型wnt-β-catenin通路蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過(guò)建立大鼠腎臟缺血再灌注損傷（Renal Ischemia Reperfusion Injury， RIRI）模型，以三七總皂苷為干預(yù)藥物，并與wnt通路激動(dòng)劑及抑制劑對(duì)比，觀(guān)察不同時(shí)間點(diǎn)血清肌酐及尿素氮、腎組織勻漿超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）及丙二醛（Malondialdehyde，MDA）、腎臟病理及腎組織中wnt/β-catenin通路相關(guān)蛋白的表達(dá)，從而探索三七總皂苷可能的腎臟保護(hù)機(jī)

2、制。
　　方法：SD大鼠90只，隨機(jī)分為5組，每組18只，分為：對(duì)照組、缺血再灌注損傷組（模型組）、三七總皂苷組（三七組）、wnt激動(dòng)劑組（激動(dòng)劑組）、wnt抑制劑組（抑制劑組）。實(shí)驗(yàn)干預(yù)：①對(duì)照組：造模前3天，每天1次尾靜脈注射與三七組等量生理鹽水，麻醉后右腎切除，左腎暴露30min后關(guān)腹。②模型組：麻醉前處理同對(duì)照組，采用切除右側(cè)腎臟，左側(cè)腎動(dòng)脈夾閉30min恢復(fù)血流的方法造模。③三七組：造模前3天，每天1次尾靜脈注射三七總皂

3、苷（150mg·kg），余處理同模型組。④激動(dòng)劑組：造模前3天，每天q12h尾靜脈注射wnt激動(dòng)劑重組DKK2蛋白（DKK2-C2，20ug·kg-1），余處理同模型組。⑤抑制劑組：造模前3天，每天q12h尾靜脈注射wnt抑制劑重組人血管內(nèi)皮抑制素（Endostar，1.5mg·kg-1），余處理同模型組。取恢復(fù)血流灌注后24h、48h、72h時(shí)間點(diǎn)，每組分別取6只大鼠的血清檢測(cè)肌酐（Serum creatinine，Scr）、尿素氮（

4、Blood Urea Nitrogen，BUN），腎組織勻漿檢測(cè)SOD及MDA含量，HE染色光鏡下觀(guān)察腎組織的病理變化并計(jì)算腎小管損傷評(píng)分，免疫組化檢測(cè)wnt4及β-連環(huán)蛋白（β-catenin）在腎組織內(nèi)的表達(dá)情況，采用Western Blot檢測(cè)腎組織中wnt4及β-catenin的表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　?。?）Scr、BUN：除對(duì)照組外，模型組和三七組及激動(dòng)劑組在24h、抑制劑組在48h達(dá)到最高值；三七組、激動(dòng)劑組各

5、時(shí)間點(diǎn)較模型組降低（P＜0.05）；抑制劑組各時(shí)間點(diǎn)兩指標(biāo)均高于較模型組（P＜0.05）。
　?。?）腎臟HE染色及腎小管損傷評(píng)分：除對(duì)照組外，各組可見(jiàn)不同程度的腎臟病理?yè)p傷。模型組、三七組、激動(dòng)劑組的腎小管損傷評(píng)分在24h達(dá)到最高值，三七組、激動(dòng)劑組各時(shí)間點(diǎn)評(píng)分較模型組降低（P＜0.05）；抑制劑組的評(píng)分在48h達(dá)到最高值，各時(shí)間點(diǎn)較模型組明顯升高（P＜0.05）。
　　（3）氧化應(yīng)激指標(biāo)MDA、SOD：除對(duì)照組外，各組M

6、DA在24h達(dá)到最高值，而SOD則在24h達(dá)到最低值。與模型組比較，三七組、激動(dòng)劑組24h、48h的MDA顯著降低（P＜0.05），24h、48h的SOD則明顯升高（P＜0.05）；抑制劑組各時(shí)間點(diǎn)MDA較模型組明顯升高（P＜0.05），SOD則明顯降低（P＜0.05）。（4）wnt4檢測(cè)結(jié)果：免疫組化顯示除對(duì)照組wnt4無(wú)明顯表達(dá)外，其余各組表達(dá)部位相同，即wnt4陽(yáng)性表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞質(zhì)中，腎小球無(wú)明顯表達(dá)，其表達(dá)趨勢(shì)與蛋白印跡

7、結(jié)果一致，即除對(duì)照組外，各組wnt4表達(dá)量在24h達(dá)到最高值；三七組、激動(dòng)劑組各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量較模型組升高（P＜0.05）；抑制劑組各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量較模型組降低（P＜0.05）。
　?。?）β-catenin檢測(cè)結(jié)果：免疫組化顯示對(duì)照組β-catenin陽(yáng)性表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞膜，其余各組β-catenin陽(yáng)性表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞漿及胞膜，腎小球無(wú)明顯表達(dá)，其表達(dá)趨勢(shì)與蛋白印跡結(jié)果一致，即除對(duì)照組外，各組β-catenin表達(dá)量從

8、24h開(kāi)始升高，模型組、三七組、抑制劑組在72h達(dá)到高峰；與模型組比較，三七組、激動(dòng)劑組各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量升高（P＜0.05）；抑制劑組則在48h達(dá)到高峰，各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量較模型組下降（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　?。?）三七總皂苷的腎臟保護(hù)機(jī)制可能與wnt/β-catenin通路蛋白上調(diào)相關(guān)，其與wnt激動(dòng)劑一樣能促進(jìn)缺血再灌注腎臟的恢復(fù)。
　　（2）wnt/β-catenin信號(hào)通路參與了缺血再灌注損傷腎臟的修復(fù)過(guò)程