MRP8-14對巨噬細胞極化的影響及其作用機制.pdf

1、肺部感染是中國面臨的重大健康問題之一，給社會造成了巨大的經濟負擔。與此同時，伴隨著各種耐藥菌的不斷出現，使得以抗生素治療為主導的方案面臨著越來越大的挑戰(zhàn)，因此研究機體自身的內在抗感染機制，將有可能為治療肺部感染提供新的思路。
　　巨噬細胞是一種極具異質性的免疫細胞，具有表型可塑性和功能多樣性的特征。在LPS、IFN-γ等的刺激下，巨噬細胞可轉化為經典激活型巨噬細胞(M1)，其特征表現為產生多種促炎細胞因子，如TNF-α、IL-6、

2、IFN-γ、iNOS和NO，起到殺滅病菌、抵抗病原微生物入侵以及抑制腫瘤生成的作用。在IL-4、IL-13等的刺激下巨噬細胞可轉化為選擇性激活型巨噬細胞(M2)，其特征是分泌抗炎細胞因子，如IL-4、IL-10、IL-13、TGF-β等，發(fā)揮抑制炎癥的作用，同時可在組織修復與重建、脂類代謝、過敏反應和腫瘤的形成過程中發(fā)揮作用。
　　髓樣相關蛋白8(MRP8)和髓樣相關蛋白14(MRP14)作為損傷相關分子模式（danger-ass

3、ociated molecular patterns，DAMPs）的成員，兩者常以復合物的形式存在，當中性粒細胞和巨噬細胞激活或壞死的時候，MRP8/14能夠被大量釋放到細胞外，參與體內炎癥反應及免疫反應的調節(jié)，進而影響炎癥以及感染性疾病的病理生理過程。
　　目的:
　　探討MRP8/14能否促進巨噬細胞向M1型巨噬細胞轉化，進而增強其殺菌能力;并且從信號通路的角度討論MRP8/14是否通過激活NF-κB調節(jié)巨噬細胞向M1型

4、轉化，使用敲基因小鼠來檢測RAGE和TLR4受體在MRP8/14調節(jié)巨噬細胞表型極化中的作用，從而進一步闡明MRP8/14促進巨噬細胞向M1型轉化以及增強其殺菌能力的機制。
　　方法:
　　1、MRP8/14刺激后巨噬細胞的表型極化情況
　　采用流式細胞術、液相芯片技術、實時熒光定量PCR技術檢測巨噬細胞極化的相關代表因子的表達。
　　2、表型極化相關信號通路的鑒定。
　　2.1 Western blot檢

5、測MRP8/14刺激后JNK和STAT1的磷酸化情況以及NF-κB的活化情況。
　　2.2 采用通路的特異性抑制劑預處理巨噬細胞后，再用MRP8/14刺激巨噬細胞，檢測巨噬細胞極化相關指標的變化情況，驗證MRP8/14調節(jié)巨噬細胞表型極化的信號通路情況。
　　3、使用敲基因小鼠檢測RAGE和TLR4受體在MRP8/14調節(jié)巨噬細胞表型極化中的作用。
　　結果:
　　1、MRP8/14促進巨噬細胞向M1型轉化

6、>　　流式細胞術、液相芯片技術以及qPCR檢測結果顯示:MRP8/14可以顯著上調M1型巨噬細胞各代表因子的表達(p＜0.01)。
　　2、MRP8/14通過NF-κB信號轉導通路介導巨噬細胞向M1型轉化
　　2.1 Westtern blot結果顯示:MRP8/14可激活Raw264.7細胞的NF-κB和JNK通路，而對STAT1通路沒有影響。
　　2.2 采用NF-κB和JNK的特異性抑制劑預處理Raw264.7細

7、胞，再給于MRP8/14刺激。實驗結果顯示:與MRP8/14組相比，Bay11-7082+MRP8/14組能顯著降低M1的各項檢測指標的表達水平(p＜0.05)，實驗結果表明，NF-κB參與了MRP8/14促進巨噬細胞向M1型轉化。
　　3、TLR4受體參與了MRP8/14對巨噬細胞表型極化的調節(jié)。
　　4、MRP8/14可以增強巨噬細胞的殺菌能力。
　　結論:
　　MRP8/14通過TLR-4-NF-κB通路促