甲基丙二酸血癥合并同型半胱氨酸血癥的MMACHC基因突變分析.pdf

1、研究背景:
　　甲基丙二酸血癥（methylmalonicacidemia，MMA）又被稱為甲基丙二酸尿癥（methylmalonicaciduria），是氨基酸與有機(jī)酸代謝異常疾病中最常見(jiàn)的一種，是支鏈氨基酸代謝途徑異常，屬于常染色體隱性遺傳性有機(jī)酸血癥性疾病。MMA主要由于甲基丙二酰輔酶A（methylmalonyl coenzyme A,MMCoA）變位酶（methylmalonyl-CoA mutase,MCM）缺陷及其輔

2、酶-5’脫氧腺苷鈷胺素（維生素B12）（Ado-Cbl）合成代謝障礙，導(dǎo)致甲基丙二酸、丙酸和甲基枸櫞酸等異常蓄積，造成多個(gè)臟器功能受到損傷，尤其是神經(jīng)系統(tǒng)的損傷。Ado-Cbl代謝異常包括cblA、cblB、cblC、cblD、cblE、cblF、cblG、cblH8個(gè)亞型，其中cblC最常見(jiàn)。
　　cblC病患者可以顯示出廣泛的臨床表現(xiàn)，跨越了產(chǎn)前階段到成年后期。而同型半胱氨酸濃度增加和甲基代謝障礙可能有助于疾病相關(guān)的并發(fā)癥，黃

3、斑和視網(wǎng)膜變性的特點(diǎn)，并且每個(gè)不同個(gè)體發(fā)病時(shí)的臨床表現(xiàn)各不相同：嗜睡、反復(fù)嘔吐、喂養(yǎng)困難、肌張力低下、低體溫、呼吸窘迫，驚厥反復(fù)發(fā)作或驚厥持續(xù)狀態(tài)、嚴(yán)重的酮癥酸中毒，高氨血癥，高乳酸血癥，肝功能損失、腎臟損失，眼科異常、皮膚異常、巨幼紅細(xì)胞性貧血、中性粒細(xì)胞減少和血小板減少，腦水腫、腦出血，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致死亡。
　　cblC病的致病基因?yàn)镸MACHC基因，該基因位于1號(hào)染色p34編碼區(qū)域，編碼cblC蛋白，功能是在細(xì)胞胞漿內(nèi)催化還原

4、脫氰反應(yīng)和合成腺苷鈷胺素反應(yīng)。當(dāng)其發(fā)生基因突變時(shí)，編碼cblC的蛋白不能夠發(fā)揮其正常的生理功能，從而導(dǎo)致疾病發(fā)生。
　　本文中3例甲基丙二酸血癥根據(jù)其典型的臨床癥狀、生化特征進(jìn)行總結(jié)，對(duì)疾病能夠早期發(fā)現(xiàn)，早期明確診斷，并進(jìn)行有效的治療，改善患者預(yù)后提供幫助。同時(shí)，積極對(duì)其先證者及父母進(jìn)行基因檢測(cè)，了解先證者疾病發(fā)生的遺傳方式（自身基因突變或遺傳自父母），并對(duì)其提供相應(yīng)的遺傳咨詢信息，在新生兒疾病篩查的早期檢測(cè)，并仔細(xì)評(píng)估cblC病

5、治療方法，為該類(lèi)疾病患者提供新的改善預(yù)后的機(jī)會(huì)，產(chǎn)前進(jìn)行診斷可減少該類(lèi)遺傳性疾病的發(fā)生，補(bǔ)充相關(guān)基因的突變信息，完善MMACHC基因突變類(lèi)型。
　　目的:
　　1．總結(jié)來(lái)自3個(gè)家系，共3例MMA患者的臨床癥狀、生化特征、治療效果；
　　2．研究MMA患者發(fā)病的分子遺傳學(xué)方式，明確診斷，了解MMACHC基因突變所發(fā)生的情況，推斷其相關(guān)性，為患者提供遺傳咨詢及產(chǎn)前診斷。
　　方法:
　　1．收集來(lái)自3個(gè)家系，共

6、3例MMA患者的住院情況包括臨床癥狀、生化特征、治療效果；
　　2．樣本采集：在研究對(duì)象簽署送檢同意書(shū)的情況下，采集研究對(duì)象及父母、50例正常健康體檢患者晨起空腹的外周靜脈血液各5ml；
　　3．基因組 DNA的提?。菏褂没蚪M DNA提取試劑盒提取提取血液樣中的基因組DNA；
　　4．引物設(shè)計(jì)：根據(jù)人類(lèi)基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中設(shè)計(jì)MMACHC基因序列的引物，采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR，Polymerase Chain React

7、ion）法擴(kuò)增目的基因，
　　5．產(chǎn)物回收：采用PCR產(chǎn)物回收試劑盒進(jìn)行產(chǎn)物回收；
　　6．上機(jī)測(cè)序：對(duì) PCR產(chǎn)物直接進(jìn)行 DNA測(cè)序，在人類(lèi)基因組數(shù)據(jù)庫(kù)GenBank中原始的基因序列進(jìn)行對(duì)比并分析，獲得基因突變位點(diǎn)。
　　結(jié)果:
　　1．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與預(yù)計(jì)擴(kuò)增片段長(zhǎng)度大致一致，無(wú)非特異性擴(kuò)增片段，可進(jìn)型步進(jìn)行純化和測(cè)序；
　　2．家系1中先證者M(jìn)MACHC基因發(fā)現(xiàn)復(fù)合雜合核苷酸變異：第3外顯子c.39

8、4C>T的雜合無(wú)義突變，第4外顯子c.656_658del核苷酸序列缺失的雜合突變。父親第3外顯子c.394C>T雜合無(wú)義突變；母親第4外顯子c.656_658del核苷酸序列缺失的雜合突變；
　　3．家系2中先證者M(jìn)MACHC基因發(fā)現(xiàn)：第4外顯子 c.609G>A的純合無(wú)義變異。受檢者其父母均為第4外顯子 c.609G>A雜合無(wú)義突變；
　　4．家系3中先證者M(jìn)MACHC基因發(fā)現(xiàn)復(fù)合雜合核苷酸變異：第1外顯子c.80A>G

9、的雜合錯(cuò)義突變，第4外顯子c.609G>A的雜合無(wú)義突變。父親第1外顯子c.80A>G雜合錯(cuò)義突變；母親第4外顯子c.609G>A雜合無(wú)義突變。
　　結(jié)論:
　　1．收集的3個(gè)家系中先證者均符合MMACHC的臨床及生化特征，診斷明確，早期臨床干預(yù)治療，預(yù)后均有明顯改善；
　　2．家系1中先證者的分子遺傳學(xué)基礎(chǔ)是c.394C>T和c.656_658del復(fù)合雜合突變的組合，經(jīng)查詢基因庫(kù)，c.656_658del變異的致病