睪丸孤核受體4在肝細胞性肝癌生長及侵襲轉(zhuǎn)移中的作用.pdf

1、本文從以下幾部分進行論述：
　　第一部分 TR4在肝細胞性肝癌及其癌旁組織中的表達
　　目的：
　　觀察睪丸孤核受體4(TR4)在肝癌組織及癌旁肝組織中的分布，初步探討TR4在肝細胞性肝癌發(fā)生中的作用。
　　方法：
　　采用免疫組織化學(xué)的方法，檢測71例臨床肝細胞性肝癌及其癌旁肝組織標(biāo)本，研究TR4在肝癌及癌旁肝組織細胞中的分布情況，同時比較兩者TR4分布的差異。
　　結(jié)果：
　　在肝癌組織細胞

2、漿中，TR4主要呈弱陽性表達，占總病例數(shù)的64.8％，其次為中等陽性表達，占總病例數(shù)的35.2％;在肝臟組織細胞漿中，TR4絕大多數(shù)呈現(xiàn)強陽性及中等陽性表達，分別占總病例數(shù)的49.2％和42.3％，其次為弱陽性表達，占總病例數(shù)的8.5％，兩組之間存在顯著性差異(P＜0.01)。在肝癌組織細胞核中，TR4陽性表達占絕大多數(shù)（包括弱陽性占52.1％、中等陽性占14.1％、強陽性7.0％），陰性表達者僅占總病例數(shù)的26.8％;而在肝臟組織細胞

3、核中，TR4主要為陰性表達，占總病例數(shù)的73.2％，其次為弱陽性表達，占總病例數(shù)的26.8％，兩組之間存在顯著性差異(P＜0.01)。
　　結(jié)論：
　　TR4在肝癌組織及肝旁肝組織中存在差異表達，提示TR4在肝癌的發(fā)生過程中可能起某種調(diào)控作用。
　　第二部分 TR4對肝細胞性肝癌增殖能力的影響
　　目的：
　　研究TR4對肝細胞性肝癌增殖能力的影響。
　　方法：
　　運用慢病毒載體系統(tǒng)，在肝癌細

4、胞系HCC-LM3及Huh7中構(gòu)建TR4敲減及過表達穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系。通過MTS法細胞增殖實驗，分別檢測TR4敲減以及TR4過表達對細胞增殖能力的影響。同時，構(gòu)建裸鼠皮下成瘤模型，在動物體內(nèi)研究HCC-LM3細胞在TR4敲減及過表達時對腫瘤增殖能力的影響。
　　結(jié)果：
　　運用慢病毒載體系統(tǒng)，成功在HCC-LM3及Huh7細胞中構(gòu)建了TR4敲減及過表達穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系，并通過Real-time PCR和Western Blot方法進行驗

5、證。MTS法細胞增殖實驗顯示，TR4敲減或過表達后對HCC-LM3及Huh7細胞的增殖能力均無影響。在裸鼠皮下成瘤模型中，將TR4敲減或過表達的HCC-LM3細胞與其對照組細胞接種到裸鼠皮下，觀察42天后，實驗組和對照組裸鼠均成瘤，TR4敲減或過表達時裸鼠皮下腫瘤的體積與重量與其對照組相比均無明顯差異。
　　結(jié)論：
　　TR4對肝細胞性肝癌的增殖能力沒有影響。
　　第三部分 TR4對肝細胞性肝癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響

6、>　　目的：
　　研究TR4對肝細胞性肝癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。
　　方法：
　　運用慢病毒載體系統(tǒng)，在肝癌細胞系HCC-LM3及Huh7中構(gòu)建TR4敲減以及TR4過表達穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系。通過細胞遷移及細胞侵襲實驗，分別檢測TR4敲減或過表達對細胞遷移/侵襲能力的影響。同時，構(gòu)建熒光素酶標(biāo)記的TR4敲減人肝癌細胞系LM3-luc-shTR4及其對照組細胞系LM3-luc-scr，通過外科手術(shù)的方式將上述兩組細胞分別接種到3只裸

7、鼠肝臟中，通過小動物活體成像系統(tǒng)檢測腫瘤生長及轉(zhuǎn)移情況，在動物體內(nèi)研究TR4對肝癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。
　　結(jié)果：
　　運用慢病毒載體系統(tǒng)，成功在HCC-LM3及Huh7細胞中構(gòu)建了TR4敲減及過表達穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系，并通過Real-time PCR和Western Blot方法進行驗證。細胞遷移及細胞侵襲實驗顯示，TR4敲減后可促進HCC-LM3及Huh7的遷移及侵襲能力，而TR4過表達后HCC-LM3及Huh7的遷移及侵襲能力