茶多糖對(duì)高糖誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用及TGF-β1、α-SMA表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的：研究茶葉提取物茶多糖（TPS）對(duì)高糖誘導(dǎo)的人腎小管上皮細(xì)胞（HK-2）的氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制，探討茶多糖對(duì)高糖誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)表達(dá)的影響。為闡釋茶多糖對(duì)糖尿病腎病的治療作用及其機(jī)制，提供實(shí)驗(yàn)性理論依據(jù)。
　　方法：(1)綠茶植物基源鑒定。(2)茶葉提取物茶多糖的制備：經(jīng)水提醇沉法提取得到茶多糖，初步純化后采用苯酚-硫酸法檢測(cè)茶多糖含量。(3)高糖誘

2、導(dǎo)HK-2細(xì)胞，在體外建立模擬高血糖所致糖尿病腎臟組織的氧化應(yīng)激損傷模型，分為正常組（NC）、高糖組（HG）、茶多糖低（200μg/mL）、中（400μg/mL）、高（600μg/mL）劑量組，刺激時(shí)間為48h。(4)四甲基偶氮唑鹽微量比色法（MTT）檢測(cè)茶多糖對(duì)HK-2細(xì)胞增殖的影響。(5)DCFH-DA法檢測(cè)茶多糖對(duì)高糖刺激的HK-2細(xì)胞內(nèi)ROS水平的影響。(6)Western-blot檢測(cè)核因子NF-E2相關(guān)因子(Nrf2)、血紅

3、素氧合酶1(HO-1)、NAD(P)H:醌氧化物還原酶1(NQO1)、TGF-β1、α-SMA蛋白水平的表達(dá)。(7)RT-PCR檢測(cè)TGF-β1、α-SMA mRNA水平的表達(dá)。
　　結(jié)果：(1)與正常組相比，高糖刺激組的ROS水平明顯升高，在給予茶多糖干預(yù)后，高糖刺激組ROS水平下降，且與TPS濃度呈劑量依賴性。(2)MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明TPS對(duì)HK-2細(xì)胞的增殖影響較小。(3)Western-blot檢測(cè)結(jié)果顯示：與正常組比較，

4、高糖組Nrf2、HO-1、NQO1表達(dá)均升高，在給予TPS干預(yù)后，與正常組和高糖組比較Nrf2、HO-1、NQO1表達(dá)均升高；與正常組比較，高糖組TGF-β1、α-SMA水平均顯著升高，在給予TPS干預(yù)后，與高糖組比較TGF-β1、α-SMA水平均下降。(4)RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示：與正常組比較，高糖組TGF-β1、α-SMA mRNA水平均顯著升高，在給予茶多糖干預(yù)后，與高糖組比較TGF-β1、α-SMA mRNA水平均顯著下降。<