基于髓核細胞新定義表型骨髓間充質(zhì)干細胞向類髓核細胞分化的體外研究.pdf

1、背景:椎間盤退變是腰痛的主要原因，其機制尚不明確。骨髓間充質(zhì)干細胞作為種子細胞用于改善甚至修復椎間盤退變在國內(nèi)外體外及體內(nèi)研究中發(fā)現(xiàn)具有可行性。既往用SOX9、Ⅱ型膠原、蛋白聚糖作為髓核細胞的特異性表型。2014年美國骨科研究學會脊柱組提出新的髓核細胞的特異性表型，本研究基于髓核細胞細胞新的特異性表型，研究骨髓間充質(zhì)干細胞向髓核細胞分化的可能性。
　　目的:對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞和髓核細胞進行體外的分離、傳代培養(yǎng)和觀察，用不同濃度

2、髓核細胞培養(yǎng)基誘導間充質(zhì)干細胞，模擬非接觸性共培養(yǎng)，基于目前髓核細胞的新定義表型，比較誘導后的間充質(zhì)干細胞和髓核細胞相關(guān)表型。
　　方法:取健康6周齡Sprague-Dawley(SD)大鼠股骨、脛骨和尾椎椎間盤，組織貼壁法分離和傳代培養(yǎng)長骨骨髓腔內(nèi)間充質(zhì)干細胞和椎間盤內(nèi)髓核細胞;倒置顯微鏡觀察間充質(zhì)干細胞和髓核細胞原代及傳代后的形態(tài)變化;流式細胞術(shù)鑒定間充質(zhì)干細胞;用不同濃度髓核細胞培養(yǎng)基誘導間充質(zhì)干細胞7d;以普通培養(yǎng)基培養(yǎng)的

3、髓核細胞和間充質(zhì)干細胞為對照，實時熒光定量PCR檢測髓核細胞和誘導后的間充質(zhì)干細胞細胞表型之間的差異，檢測細胞表型為:HIF-1α、GLUT-1、蛋白聚糖、Ⅱ型膠原、SHH、Brachyury(T)、Krt8、Krt18、Krt19、CA12、CD24。
　　結(jié)果:骨髓間充質(zhì)干細胞中CD29、CD44陽性表達、CD45陰性表達。髓核細胞中HIF-1α、GLUT-1、Acan、Col2、SHH、Brachyury、Krt8、Krt1

4、8、Krt19、CA12、CD24陽性表達。實時熒光定量PCR顯示相比于髓核細胞，未處理的間充質(zhì)干細胞低氧誘導因子HIF-1α、GLUT-1、Acan、Col2、SHH、Brachyury、Krt8、Krt18、Krt19、CA12、CD24未見明顯表達。加入50％髓核細胞培養(yǎng)基的間充質(zhì)干細胞中細胞HIF-1α、GLUT-1、Acan、Col2、SHH、Brachyury、Krt8、Krt18、Krt19、CA12、CD24表達上調(diào)。加