簡介：學位論文獨創(chuàng)性聲明學位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得南昌大學或其他教育機構(gòu)的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文作者簽名手寫冱翻簽字日期聊飛年6月力日學位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學位論文作者完全了解南昌大學有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南昌大學可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編本學位論文。同時授權(quán)中國科學技術(shù)信息研究所和中國學術(shù)期刊光盤版電子雜志社將本學位論文收錄到中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫和中國優(yōu)秀博碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫中全文發(fā)表，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信息服務(wù)。保密的學位論文在解密后適用本授權(quán)書學位論文作者簽名手寫璽翻導師簽名手寫∥融簽字日期7呵F～年【月凡日簽字日期幻卜年G月幻日摘要摘要目的觀察MFVII／FC融合基因?qū)乐孛庖呷毕軸CID鼠人前列腺癌PC一3皮下移植瘤的影響。方法應(yīng)用人前列腺癌PC一3細胞構(gòu)建SCID鼠移植瘤模型，當腫瘤體積長至100150MM3時，18只荷瘤SCID小鼠，隨機分為治療組，陰性對照組和空白對照組N6分別給予瘤內(nèi)注射攜帶MFVII／FC融合基因的慢病毒1X108TU／02ML／次，空慢病毒載體1X10STU／02ML／次和生理鹽水02ML／次，每兩天一次，總共注射七次。動態(tài)觀察移植瘤體積變化42天后，處死荷瘤SCID鼠，剝離移植瘤，測量各組的腫瘤體積和瘤重，計算腫瘤抑制率，免疫組織化學檢測CD34抗原以了解腫瘤微血管密度。結(jié)果F11瘤體內(nèi)注射表達MFVII／FC的慢病毒能顯著抑制腫瘤生長，治療組較陰性對照組、空白對照組瘤重、腫瘤體積顯著減少P001。2治療組比陰性對照組和空白對照組，微血管密度顯著降低P001。結(jié)論表達MFVII／FC融合基因慢病毒載體可以顯著抑制前列腺癌PC一3皮下移植瘤的生長，并可以減少腫瘤內(nèi)微血管密度，提高抑瘤率。關(guān)鍵詞MFVII／FC融合基因基因療法前列腺癌慢病毒SCID鼠。

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簡介：四川師范大學碩士學位論文網(wǎng)絡(luò)成癮者的認知加工偏向研究姓名朱丹申請學位級別碩士專業(yè)發(fā)展與教育心理學指導教師李媛20100410THESTUDYONINTERNETADDICTIONDISORDERS’L●COGNITIVEBIASABSTRACTWITHTHEDEVELOPMENTOFINTERNETINTERNETADDICTIONDISOFDERBECOMESAHOTISSUEBYOURSOCIETYALOTOFSTUDENTSNEGLECTEDTHEIRSTUDYBECAUSEOFINTERACTANDAGREATMANYOFADULTSDESTROYTHEIRFAMILYDUETOINTERACTOVERUSEINTEMETSERIOUSLYIMPACTEDPEOPLE’SHEALTHANDLIFESOMERESEARCHESHAVESHOWNTHATTHECAUSEOFINTERNETADDICTIONDISORDERMAYBEDUETOTHEIRCOGNITIVEBIASINPSYCHOLOGYRESEARCH，WEUSUALLYSTUDYCOGNITIVEBIASTHROUGHATTENTIONBIASINTHISSTUDYWEDETECTINTERACTADDICTIONDISORDERS’ATTENTIONBIASBASEDONCOGNITIVEBIAS硒ESTUDYHASTWOEXPERIMENTSTOTALLY勸EFIRSTEXPERIMENTDETECTEDINTEMETADDICTIONDISORDERS’ATTENTIONBIASFORWORDSTIMULUS，THESECONDEXPERIMENTSTUDIEDINTEMETADDICTIONDISORDERS’ATTENTIONBIASFORPICTURESTIMULUSANDCOMPAREDTHEPRIMINGEFFECTBETWEENWORDANDPICTURESTIMULUSTHERESULTSSHOWEDTHAT1INTERACTADDICTIONDISORDERSHADATTENTIONBIASONANRELATIVEINTEMETSTIMULUSEXPECTFORPOSITIVEEMOTIONSTIMULUS2INTEMETADDICTIONDISORDERS’REACTIONTIMEFORPOSITIVEEMOTIONWASLONGERTHANCONTROLGROUPANDTHEDIFFERENCESAREVERYSIGNIFICANTSOTHEREISNOATTENTIONBIAS3NONINTERNETADDICTIONDISORDERS’REACTIONSWERENOTDIFFERENT，REGARDLESSOFTHETARGETSTIMULUSORCONTROLSTIMULATIONSOTHEREISNOATTENTIONBIAS4ALLSUBJECTS’REACTIONTIMEFORPICTURESWASSHORTERTHANWORDSNEIRPRIMINGEFFECTSFORPICTUREWEREBETTERTHANFORWORDTOSUMUP，THEINTERACTADDICTIONDISORDERHADCOGNITIVEBIASOFFRELATIVEINTEMETSTIMULUS，INTERNETADDICTIONDISORDERIMPACTEDPEOPLE’SATTENTIONFUNCTIONNETWORKFORINTERACTADDICTIONDISORDERSWASNOTSOPLEASANTPEPOLESPRIMINGⅡ

簡介：目的本研究旨在全面了解南昌市接受抗病毒治療的艾滋病患者的營養(yǎng)狀況，對其提出相應(yīng)的營養(yǎng)指導建議及調(diào)整措施，初步探討抗病毒治療對艾滋病患者血液生化指標的影響，為進行營養(yǎng)支持療法提供有價值的參考。方法以2009年6月1日至7月1日及2010年12月5日至2011年1月5日江西省南昌市第九醫(yī)院艾滋病門診收診的接受抗病毒治療2年以上的90名艾滋病患者為調(diào)查對象，采用食物頻率問卷調(diào)查和3天24小時膳食回顧法進行膳食結(jié)構(gòu)有關(guān)資料的收集，調(diào)查研究對象食物攝入情況；采集研究對象的尿液20ML，試驗測定尿液中維生素B1、維生素B2、維生素C和肌酐的含量；采集研究對象的血樣，分析免疫學指標、病毒學指標、肝功能性指標及貧血檢測指標的變化情況。結(jié)果調(diào)查對象總能量攝入不足，總體營養(yǎng)水平低于2002年全國調(diào)查平均水平，70％患者體質(zhì)指數(shù)正常，調(diào)查對象每標準人日能量攝入量為1870KCAL7824KJ，蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物攝入量分別為578G、524G、3006G，維生素B1、維生素B2、維生素C含量正常的患者比例分別744％、811％、722％，經(jīng)過一年的抗病毒治療后，調(diào)查對象CD4T淋巴細胞有不同程度的升高，病毒載量有不同程度的下降，2010年調(diào)查對象肝功能指標結(jié)果與2009年結(jié)果相比有所降低，差異具有統(tǒng)計學意義P結(jié)論本次調(diào)查中的艾滋病患食物攝入量不足，膳食結(jié)構(gòu)不合理，飲食不規(guī)律，抗病毒治療在有效抑制病毒增長的同時也對患者的肝功能、貧血性指標造成影響，因此醫(yī)院在進行抗病毒治療的同時應(yīng)加強營養(yǎng)宣傳教育，做好醫(yī)患溝通，盡可能根據(jù)每位患者的病情和營養(yǎng)狀況制定個性化的治療方案和飲食結(jié)構(gòu)。

簡介：第三軍醫(yī)大學碩士學位論文血管性癡呆患者認知功能障礙的臨床研究姓名李鳳鵬申請學位級別碩士專業(yè)神經(jīng)病學指導教師鄭健200251CLINICALSTUDYOFCOGNITIVEDISORDERINVASCULARDEMENTIAPAFIEN伍ABSTRACTOBJECTIVETOENHANCETHEUNDERSTANDINGOFTHECLINICALCHARACTERISTICSOFVASCULARDEMENTIAVDFORIMPROVINGITSDIAGNOSTICQUALITY．METHODSTHESUBJECTSINCLUDEDTHIRTYVDPATIENTS，THIRTYCEREBRALINFARCTIONPATIENTSWITHOUTOBVIOUSCONGNITIVEDEFICITSANDTHIRTYNORMALAGINGS．THECOGNITIVEFUCTIONSOFTHESUBJECTSWEREASSESSEDBYMINIMENTALSTATEEXAMINATIONMMSE，BRIEFSCREENINGSCALEFORDEMENTIABSSDANDCLOXCLOCKDRAWINGTASK．THEEVENTRELATEDPOTENTIALP300OFTHESUUJECTSEVOKEDBYAUDITORYSTIMULATIONWERERECORDEDANDANALYSED．THEFOCALCEREBRALLESIONSANDTHECEREBRALATROPHYWEREANALYSEDBYCTSCAN．RESULTS1VDPATIENTSHADOBVIOUSCOGNITIVEDISORDERINATTENTION，SHOATERMMEMORY，CALCULATION，VERBALCOMPREHENSION，VERBALIZATION，READCOMPREHENSION．TIMEORIENTATIONANDVISUOSPATIALCOGNITION．2THEP300PEAKLATENCIESPLSIGNIFICANTLYPROLONGEDINVDPATIENTS．3THEPATIENTSWITHMULTIPLEINFARCTIONWEREMOREFREQUENTLYSEENINVDPATIENTSTHANINCEREBRALINFARCTIONPATIENTSWITHOUTOBVIOUSCONGNITIVEDEFICITS．4CEREBRALATROPHYESPECIALLYTHEATROPHYOFFRONTALLOBEWASCOMMONINVDPATIENTS．5THERESISTENCEINDEXRIOFMOSTCEREBRALVESSELSINVDPATIENTSINCREASED．6THEREWEREMORESUFFERERSWITHAHISTORYOFSTROKEANDHYPERTENSIONINVDPATIENTSTHANINCEREBRALINFARCTIONPATIENTSWITHOUTABVIOUSCOGNITIVEDISORDER．CONCLUSIONS1DISORDERINTHEMEMORY，ATTENTIONANDTHEFUNCTIONSRELATEDTOLANGUAGEAND、，ISUOSPATIALCOGNITIONAREPROMINENTINTHECOGNITIVEDEFICITSOFVDPATIENTS．2THECOGNITIVEDISORDERSARETHECOMMONCOMPLICATIONINCEREBRALINFACTIONPATIENTS．3P300PLISALLOBJECTIVEINDEXFORASSESSINGTHECOGNITIX’EFUNCTIONOFVDPATIENTSANDCEREBRALINFARCTIONPATIENTSIIL

簡介：登革病毒DENV是最常見的地理分布最廣的，通過節(jié)肢動物（伊蚊）傳播的蟲媒病毒，屬于黃病毒科黃病毒屬，分布于全球100多個國家，特別是熱帶和亞熱帶地區(qū)。近十年來，登革熱在全世界的發(fā)病率提高了近30倍。世界衛(wèi)生組織估算，全球每年登革病毒感染數(shù)目約為5千萬到1億人，而且兩種以上血清型病毒的共循環(huán)，以及敏感人群的不斷出現(xiàn)，不但導致登革熱流行頻率加快，也使登革病毒繼發(fā)感染引起的病死率很高的登革出血熱登革休克綜合征病例大量出現(xiàn)。目前全球大約有25億人受登革病毒感染的威脅，每年大約有5000萬人感染登革熱，其中大約有210萬的嚴重病例，50萬例登革出血熱，20000例死亡病例。登革病毒感染引起的病變范圍很廣，從自限性疾病到嚴重危及生命的登革熱、登革出血熱以及登革休克綜合征。隨著全球經(jīng)濟一體化程度的加快和氣候的持續(xù)變暖、加上蚊媒的擴散速度加快、分布范圍變廣，登革熱登革出血熱已成為熱帶、亞熱帶地區(qū)最為重要的蚊傳播毒性疾病，是重要的公共衛(wèi)生問題。登革病毒是一個正義單鏈RNA病毒，包括四種血清型DENV14。登革病毒基因組RNA編碼3個結(jié)構(gòu)蛋白衣殼蛋白、包膜糖蛋白、膜蛋白及其前體C、E、PRMM和7個非結(jié)構(gòu)蛋白NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B、NS5。包膜糖蛋白E是主要的病毒顆粒包膜糖蛋白，是由494～501氨基酸殘基組成的、分子質(zhì)量約為55～60KDA的糖蛋白，其編碼序列在蟲媒病毒中的同源性較高（約為40％）且蛋白中所有CYS殘基均高度保守，黃病毒屬各成員E蛋白之間具有相似的結(jié)構(gòu)和功能。登革病毒以同源三聚體形式存在于成熟病毒顆粒表面。結(jié)晶學的研究表明，登革病毒的包膜糖蛋白E，分為3個結(jié)構(gòu)域ⅠⅢ。在三個結(jié)構(gòu)中，Β鏈形成的二級結(jié)構(gòu)是其主要結(jié)構(gòu)。結(jié)構(gòu)域Ⅰ位于E蛋白單體中央，E蛋白Ⅱ區(qū)折疊成長的指樣結(jié)構(gòu)，E蛋白C端的氨基酸殘基構(gòu)成了結(jié)構(gòu)域Ⅲ。因為在所有成熟具有感染性的黃病毒中E蛋白均是由與病毒融合有關(guān)的同源二聚體形成，推斷E蛋白的所有結(jié)構(gòu)都可能和病毒與細胞的融合過程有關(guān)。其中E蛋白Ⅱ區(qū)中第98～111位氨基酸殘基組成的CD環(huán)，富含甘氨酸且具有很強的疏水性，序列組成在幾乎所有的蟲媒黃病毒中高度保守。最近研究發(fā)現(xiàn)，CD環(huán)可在E蛋白由二聚體向三聚體的轉(zhuǎn)變過程中插入胞膜，參與病毒與宿主細胞膜的融合，被認為是病毒融合靶點，或認為是潛在的病毒融合肽。推斷第一、第二結(jié)構(gòu)域可能與登革病毒發(fā)病機制相關(guān)。病毒受體可以定義為位于宿主細胞表面能夠被病毒吸附蛋白（VIRUSATTACHMENTPROTEIN，VAP）識別并與之結(jié)合，從而引起病毒感染的分子復合物，其化學本質(zhì)是糖蛋白、蛋白聚糖、脂類或糖脂，大多屬于蛋白質(zhì)。病毒對細胞的感染過程實質(zhì)上就是病毒與宿主細胞作用的過程，病毒與細胞表面受體的結(jié)合是發(fā)生病毒感染的前提條件。這種結(jié)合作用客觀上反映了病毒結(jié)構(gòu)蛋白與受體空間構(gòu)象上的對應(yīng)關(guān)系。在登革病毒的初次感染過程中，位于病毒顆粒表面的結(jié)構(gòu)蛋白與細胞表面上的受體結(jié)合，并通過膜整合或內(nèi)吞作用細胞，進而啟動一系列生物學事件。而在登革病毒的二次感染過程，登革病毒還可與體內(nèi)業(yè)已存在的病毒特異性非中和抗體如IGG形成免疫復合物，并通過細胞上的FC受體結(jié)合進入細胞，這種抗體依賴性感染增強ANTIBODYDEPENDENTENHANCEMENTADE作用可能與登革出血熱，登革休克綜合征的發(fā)病機制有關(guān)。病毒與細胞受體的特異結(jié)合是病毒在長期進化中與宿主相互作用的結(jié)果。病毒為了獲得更多的感染機會，通常能夠根據(jù)入侵途徑和靶細胞的不同，通過進化獲得識別多種細胞受體的能力，最大限度地滿足自身增殖的需要。目前認為，病毒與受體的結(jié)合是一個多步驟過程，涉及不同的病毒吸附蛋白及多個靶細胞受體，細胞表面的結(jié)合分子可以是特異性的，也可以是非特異性的，病毒可能與一個以上的細胞表面分子結(jié)合，且同一病毒與不同細胞所結(jié)合的受體可能不同。目前實驗室鑒定的潛在的登革病毒受體不下十幾種。作為典型的蚊媒病毒，登革病毒既能在蚊蟲細胞中有效復制，也能感染人體并導致發(fā)病，其在蚊蟲細胞中致病機理的研究歷來受到重視。隨著受體研究的逐步深入，蚊傳黃病毒的致病機制有望得以最終闡明，將在選擇抗病毒藥物靶點、設(shè)計新型疫苗中發(fā)揮不可估量的作用。目的1在大腸桿菌中表達登革Ⅱ型病毒包膜糖蛋白E的第一、二結(jié)構(gòu)域DⅠ，DⅡ，并對其進行免疫反應(yīng)性鑒定2哺乳動物BHK21細胞連接登革Ⅱ型病毒受體分子，并對其進行功能研究3不同期白蚊伊蚊總蛋白的提取及潛在受體的篩選。方法1登革Ⅱ型病毒接種乳鼠，提取總RNA2并設(shè)計一對特異性引物，經(jīng)RTPCR擴增目的片段3以DV2ED12載體為模板，PCR擴增E蛋白D12基因片斷并純化4雙酶切PCR純化產(chǎn)物和質(zhì)粒PET28A，構(gòu)建重組質(zhì)粒PET28ADV2ED125篩選陽性菌落，并轉(zhuǎn)化至ECOLIBL21感受態(tài)細胞6IPTG誘導表達，表達目的蛋白進行SDSPAGE分析，并進行WESTERNBLOT鑒定重組蛋白免疫反應(yīng)性7哺乳類動物細胞BHK21的培養(yǎng)8登革病毒的擴大培養(yǎng)與純化9RTPCR法及間接免疫熒光法IFA檢測細胞感染登革病毒10VOPBA（VIRUSOVERLAYPROTEINBLOTBINDINGASSAY）病毒覆蓋蛋白結(jié)合試驗）方法篩選BHK21細胞連接登革Ⅱ型病毒的受體分子11白蚊伊蚊的飼養(yǎng)12不同期白蚊伊蚊總蛋白的提取及潛在受體的篩選。結(jié)果1提取乳鼠總RNA，RTPCR擴增得到約900BP的E蛋白第一、二結(jié)構(gòu)域基因片段2重組質(zhì)粒PET28ADV2ED12經(jīng)XHO1和NDE1雙酶切后，可見約900BP大小的酶切片段3重組菌BL21DE3PET28ADV2ED12經(jīng)IPTG誘導后在37KDA位置有明顯的誘導后表達帶，其大小與預測值一致。超聲裂解重組菌后，分別取上清與沉淀經(jīng)12％SDSPAGE分析，顯示重組蛋白主要以包涵體形式存在于沉淀中4WESTERNBLOT結(jié)果顯示，重組菌誘導前的全菌蛋白沒有與HISTAG單抗及登革病毒單抗D111反應(yīng)的條帶，而誘導后的全菌蛋白和在相對分子質(zhì)量為37000的位置均有與HISTAG單抗反應(yīng)的特異條帶5與重組誘導前的全菌蛋白無反應(yīng)，只在誘導后的全菌蛋白中有特異的條帶出現(xiàn)，且與預測的相對分子質(zhì)量為37000的位置相符合6BHK21細胞蛋白病毒孵育組在30KDA及60KDA的位置有特異性的條帶出現(xiàn)，而陰性對照組無此條帶7在白紋伊蚊幼蟲、蛹和雌蚊中得到約35KDA大小的條帶，而雄蚊無這一分子，提示白紋伊蚊35KDA的DENV連接分子呈現(xiàn)登革病毒組織向性，推測其具有特異性。結(jié)論1成功地在大腸桿菌中表達登革Ⅱ型病毒包膜糖蛋白E的第一、二結(jié)構(gòu)域DⅠ，DⅡ，對其進行免疫反應(yīng)性鑒定，鑒定結(jié)果表明其具有良好的免疫反應(yīng)性2VOPBA法初步篩選出兩個BHK21細胞連接登革Ⅱ型病毒的30及60KDA的病毒結(jié)合分子，R3060蛋白分子進一步鑒定和功能研究正在進行3VOPBA法初步篩選出的35KDA分子在除了雄蚊以外的三個階段均具有，推測其具有特異性。對其進一步的鑒定和功能研究正在進行。

簡介：浙江大學碩士學位論文溶癌腺病毒ZD55IL24殺傷舌鱗癌細胞的體外實驗研究姓名褚群峰申請學位級別碩士專業(yè)口腔臨床醫(yī)學指導教師劉建華汪國華20060501浙江大學碩士論文方法1、利用攜帶有能表達綠色熒光蛋白的腺病毒載體ZD55一GFPGTE蛆N啪SCENTPROTEIN，體外轉(zhuǎn)染舌鱗癌細胞株TCA8113，在熒光顯微鏡和相差顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效果。2、應(yīng)用流式細胞術(shù)定量檢測GFP的表達量。3、WESTEMBLOT檢測舌鱗癌細胞株TCA8113的C朋№ECOXS扯HE_ADENOVIMSREC印TOR的表達。4、應(yīng)用MRR法，檢測ZD55一Ⅱ24對舌鱗癌細胞株訛8113增殖的影響。5、應(yīng)用結(jié)晶紫染色，檢測ZD55一M24對舌鱗癌細胞株TCA8113的細胞毒性作用。同時還檢測了對正常人肺成纖維細胞NOM試H啪觚LUNGFIBROBL船TSNⅢ量的毒性作用。6、WEST啪BLOT檢測ZD55一Ⅱ，24轉(zhuǎn)染后舌鱗癌細胞株TCA8113的C髂PA∞．3的表達。結(jié)果熒光顯微鏡結(jié)果顯示，不同感染復數(shù)MILITIPLICNYOFINFBCTION，MOI的ZD55一GFP轉(zhuǎn)染TCA8113細胞株48小時后，能夠表現(xiàn)不同強度的熒光。隨著感染復數(shù)的提高，熒光強度相應(yīng)增強。相差顯微鏡結(jié)果顯示，感染后的細胞形態(tài)發(fā)生了明顯改變。采用流式細胞術(shù)檢測顯示，隨著感染復數(shù)的增加，熒光蛋白的表達量也相應(yīng)提高。通過WESTERNBLOT檢測TCA8113的CAR的表達狀況，相比于白血病細胞株K562、I沁如ⅡLI，舌鱗癌細胞株TCA8113具有較明顯的CAR表達。采用MH比色法檢測ZD55一IL24對TCA8113的增殖影響。結(jié)果顯示，不同感染復數(shù)O、L、LO、LOOMOI的ZD55一IL24處理TCA8113細胞株5天后，具有明顯的抑制作用，且表現(xiàn)為劑量依賴性。相同感染復數(shù)100MOI的ZD55一IL24處理TCA8113細胞3、5、7天后，結(jié)果顯示，對TCA8113具有明顯的抑制作用，且表現(xiàn)為時間依賴性。2

簡介：黲R’醞⑧ADISSERTATIONSUBMITTEDTOTONGJIUNIVERSITYINCONFORMITYWITHTHEREQUIREMENTSFORTHEDEGREEOFMASTEROFMEDICINE■L■■■■■●■O■I，●■●RESEARCNONTNEINNIBITLONOTOSTEOSARCOMAANDLTSPULMONARYMETASTASISBYADENOVIRUSMEDIATEDVEGFSIRNASUPPORTEDBYTHENATURALSCIENCEFOUNDATIONOFCHINANO30471760DISCIPLINEMAJORCANDIDATESUPERVISORCLINICALMEDICILLESURGERYIRTL●●RN1MNLANG10NG一■，VICEPROFJIONGMEIMAY2006夠“，■進行論文表的作品的內(nèi)容。對本論文所涉及的研究工作做出貢獻的其他個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本學位論文原創(chuàng)性聲明的法律責任由本人承擔。簽名年月日泔1

簡介：四川大學博士學位論文端粒酶催化亞單位重組腺病毒疫苗的抗腫瘤作用的實驗研究姓名丁振宇申請學位級別博士專業(yè)腫瘤學指導教師魏于全20040422四川大學博士論文及抗MHCI單抗能取消這種特異性殺傷，而抗CD4及抗MHCII單抗則無此效應(yīng)。在去除了CD8或CD4淋巴細胞亞群后，ADTM免疫后的小鼠則無腫瘤抑制效應(yīng)的出現(xiàn)。而去除了NK細胞亞群的小鼠部分失去了抗瘤效果。淋巴細胞過繼也證實CD8及CD4細胞亞群有明顯的腫瘤生長抑制作用，將綠色熒光蛋白GFP作為示蹤蛋白，我們發(fā)現(xiàn)甘露聚糖化的ADGFP能靶向呈遞到脾臟DC細胞。綜上所述，甘露聚糖化的腺病毒能將抗原特異性呈遞到DC細胞。用這種方法制備的TERT腺病毒疫苗能在小鼠體內(nèi)引發(fā)細胞免疫反應(yīng)，產(chǎn)生抗腫瘤作用。我們的實驗為糖基化修飾的腺病毒疫苗在人類腫瘤的主動性免疫治療中應(yīng)用提供了可行的實驗基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞TERT重組腺病毒腫瘤疫苗樹突狀細胞甘露聚糖

簡介：丙型肝炎病毒HEPATITISCVIRUS，HCV屬于黃病毒科、丙型肝炎病毒屬，為有包膜的單正鏈RNA病毒。目前全球約有18億人感染HCV，大多數(shù)為慢性感染，部分感染者可發(fā)展為肝硬化和肝細胞癌。HCV的RNA聚合酶缺少校對功能，致使HCV整個基因組具有很高的變異性，但HCV基因的變異呈不平衡分布位于包膜蛋白2E2氨基端的27個氨基酸殘基變異性最為突出，即HVR1。HVR1高度暴露于包膜蛋白表面，其中含有中和抗體表位，可以誘導宿主產(chǎn)生針對該區(qū)域的抗體，產(chǎn)生的抗體可以高效中和HCV的感染，但HVR1的基因序列高度變異，先前由宿主免疫細胞產(chǎn)生的抗體不能識別變異后的HVR1，因此病毒得以逃避宿主細胞的免疫監(jiān)控并在病人體內(nèi)持續(xù)感染進而使感染慢性化。眾多實驗室都將HVR1作為HCV疫苗研發(fā)的重要靶標，但自1989年丙型肝炎病毒首次命名至今，仍沒有一個真正有效的保護性疫苗問世。HCV感染會引起肝內(nèi)生化代謝紊亂，包括脂質(zhì)代謝障礙和載脂蛋白合成異常，與其他病毒性肝炎相比，HCV感染慢性化后，中重度肝細胞脂肪變性包括胞質(zhì)內(nèi)脂滴聚集是其典型組織病理學特征。HCV是有包膜RNA病毒，其表面有不同數(shù)量的脂蛋白包裹，所以病人血清中純化得到的HCV病毒顆粒呈現(xiàn)不同的密度分布，并且不同密度的病毒顆粒感染性也不同。有研究發(fā)現(xiàn)HVR1的刪除會導致低密度病毒顆粒數(shù)目下降，也就是減弱了HCV的脂蛋白結(jié)合能力，可見HVR1在病毒與脂蛋白結(jié)合的過程中亦發(fā)揮重要的作用。多項研究證明HVR1同時還在與宿主SRBI受體結(jié)合以及介導病毒入侵的過程中起關(guān)鍵作用，HVR1具有如此重要的生物學功能，那么其結(jié)構(gòu)必然具有相對穩(wěn)定性和保守性，雖然HVR1是HCV基因組中變異頻率最高的部分之一，但對HCV一系列分離株的序列分析表明一些氨基酸殘基的位點是高度、或者相對保守的。盡管人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)HVR1同時行駛著誘導宿主免疫反應(yīng)，脂蛋白結(jié)合以及介導病毒與受體結(jié)合的多重功能，但目前尚不清楚其結(jié)構(gòu)與生物學功能的對應(yīng)關(guān)系。一、HCV高變區(qū)1中介導病毒細胞入侵關(guān)鍵氨基酸殘基的鑒定首先我們以HCVPP作為研究模型，以HCV1A亞型的H77株為模式株，用單一氨基酸殘基刪除掃描的方法分析HVR1中27個氨基酸殘基分別對HCV細胞入侵的影響，實驗結(jié)果明確的鑒定出HVR1中介導HCV細胞入侵的關(guān)鍵氨基酸殘基ALA14，GLY15，LYS25，GLN26以及ASN27，其中任意一個殘基的刪除對HCVPP感染性的影響都是致命的，相比之下，其他22個氨基酸殘基的刪除對HCVPP感染性并未造成明顯影響。再用HCV入侵相關(guān)受體結(jié)合實驗進行機制分析，我們證明這5位氨基酸殘基介導了病毒包膜蛋白與宿主細胞SRBI受體的結(jié)合。氨基酸殘基合并刪除實驗進一步的證明了我們的結(jié)論，HVR1氨基端13個殘基的刪除以及第1624位9個氨基酸殘基的刪除不會顯著降低HCVPP的感染力。除了決定HCV細胞入侵的5個氨基酸殘基之外，HVR1氨基端的13個氨基酸殘基可以通過適當?shù)耐蛔?，增強病毒與受體的結(jié)合能力從而增強病毒的細胞入侵能力，并且這一區(qū)域適當?shù)耐蛔冞€可以增強病毒的抗中和能力從而更利于病毒的免疫逃避和持續(xù)感染。二、HCV高變區(qū)1中誘導中和抗體產(chǎn)生的抗原表位的鑒定我們將HVR1分為氨基段，中段和羧基段三部分肽段分別與TRX融合表達后免疫家兔來檢測HVR1的27個氨基酸殘基在誘導宿主免疫反應(yīng)過程中是否存在差異，我們發(fā)現(xiàn)HVR1的氨基端13個氨基酸殘基不能誘導宿主產(chǎn)生抗體，而第16到24位的9個氨基酸殘基是HVR1中唯一的中和表位，這9個氨基酸殘基對于病毒細胞入侵無關(guān)緊要，但含有肝素結(jié)合位點，有利于HCV的粘附，更為重要的是，高密度脂蛋白HDL介導的HCV感染增強作用依賴于該9個氨基酸殘基的存在，該九個殘基還可通過與HDL的作用顯著下調(diào)E2抗體的中和活性，小鼠DNA免疫試驗也進一步驗證了我們的結(jié)論。三、HCV高變區(qū)1中介導病毒顆粒與脂蛋白結(jié)合關(guān)鍵區(qū)域的鑒定將濃縮的HCVCC進行碘克沙醇密度梯度離心，發(fā)現(xiàn)密度偏低的病毒顆粒具有強感染性，而隨著HCVCC病毒顆粒密度的升高，其感染性也逐漸降低。此外，HDL對不同密度HCVCC感染的促進作用差異顯著，其對低密度以及中等密度HCVCC感染的促進作用不明顯，卻顯著增強高密度HCVCC的感染性。先前我們已證明HVR1中存在一個由9個氨基酸殘基組成的功能結(jié)構(gòu)域是誘導宿主產(chǎn)生抗體的主要抗原表位，并且HDL介導的HCV感染增強作用依賴于該9個氨基酸殘基的存在，本部分實驗我們發(fā)現(xiàn)刪除了這9個氨基酸殘基后，HCVCC病毒顆粒的密度分布曲線發(fā)生了明顯改變，低密度的病毒顆粒數(shù)目明顯下降，并且感染性也顯著降低，而更多的病毒顆粒則集中在密度偏高幾層，這和刪除了整個HVR1的HCVCC所呈現(xiàn)出的病毒密度曲線趨勢幾乎是一致，這說明在HVR1中，決定HCV病毒顆粒與脂蛋白結(jié)合的關(guān)鍵部位恰恰就是這個由9個氨基酸殘基組成的抗原決定區(qū)。在HDL對不同密度病毒顆粒的感染增強試驗中，刪除了9個氨基酸殘基的任何密度層病毒顆粒的感染性均不再被HDL所增強。小結(jié)我們鑒定出HVR1中至少存在三個功能結(jié)構(gòu)域，它們之間相互協(xié)調(diào)發(fā)揮著微妙的作用HVR1的抗原決定區(qū)在病毒顆粒表面形成一個高度凸起，在脂蛋白結(jié)合過程中行駛一個非特異性“脂抓手”作用，結(jié)合在病毒顆粒表面的脂蛋白又通過與宿主SRBI受體的結(jié)合拉近病毒顆粒與靶細胞的空間距離，使得抗原決定區(qū)兩側(cè)的SRBI結(jié)合位點更易于與SRBI受體結(jié)合并啟動HCV細胞入侵的一系列步驟更為有意思的是抗原決定區(qū)的空間凸起又是誘導宿主產(chǎn)生抗體的關(guān)鍵抗原表位，但其自身又呈現(xiàn)了高度的變異，使得宿主產(chǎn)生的抗體不能識別宿主體內(nèi)新釋放出的病毒顆粒，從而達到免疫逃避和持續(xù)感染的目的而恰恰也是這樣一個抗原表位，因為其自身的空間高度凸起，使得HCV病毒顆粒表面包裹著大量的脂蛋白，脂蛋白覆蓋住了HCV病毒顆粒表面其他真正意義上的保守中和抗體表位，使得宿主細胞不能大量產(chǎn)生可以識別病毒顆粒表面保守位點的中和抗體，我們認為這個“脂抓手”同時又起到了“免疫誘餌”的作用。人們往往將HVR1的27個氨基端殘基作為一個整體進行研究，我們的實驗對HVR1的功能意義進行了深刻的剖析與闡釋，并精確地鑒定出HVR1結(jié)構(gòu)與功能之間的對應(yīng)關(guān)系，這為今后保護性疫苗以及抗病毒藥物的研發(fā)都提供了重要的啟示。

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簡介：丙型肝炎病毒HCV為單股正鏈RNA病毒，其基因組編碼約3010～3033AA的蛋白前體，從N端起依次為核心蛋白C、包膜蛋白E、非結(jié)構(gòu)蛋白NS1NS5B。HCV具有高度的變異性，能夠迅速突變逃逸宿主的免疫系統(tǒng)。因此，給疫苗的研究帶來許多的困難。近年來的研究提示理想的HCV疫苗必須能夠誘發(fā)高水平、廣譜而特異的體液免疫應(yīng)答和細胞免疫應(yīng)答。針對HCV的高度變異性及免疫特點，在HCV基因產(chǎn)物中優(yōu)選了5個具有良好免疫原性的高度保守BT細胞表位，組合成一個多表位抗原基因PCX，這些表位分別來自核心蛋白1～16AA，132～141AA，E1126～135AA，NS3139～147AA及NS5B768～775AA，以及破傷風毒素的T細胞表位用以增強T細胞免疫。前期的研究表明與Β半乳糖苷酶融合表達的多表位抗原PCX具有良好的HCV免疫特異性。PCX基因經(jīng)過串聯(lián)重復之后，構(gòu)建成多表位抗原基因PCX3，與6HISTAG融合后，在ECOLI宿主中獲得高效表達。利用C端融合的6HISTAG經(jīng)過NI2NTAAGAROSE親和層析柱純化后，得到高純度的目的蛋白。利用BCA法對蛋白質(zhì)進行定量。WESTERNBLOT結(jié)果顯示原核或真核表達的PCX3抗原均能被HCV患者陽性血清所識別，表明多表位抗原具有能被HCV抗體特異性識別的表位。ELISA結(jié)果顯示來自不同地區(qū)的不同患者血清中抗HCV抗體能與PCX3抗原特異反應(yīng)，62份陽性血清中PCX3抗原檢測的檢出率為838﹪，提示PCX3抗原的B細胞表位能被HCV抗體廣泛識別。而PCX抗原的檢出率為70﹪，表明經(jīng)過串聯(lián)重復后的抗原與HCV抗體的反應(yīng)更強，顯示出良好的免疫原性。純化的PCX3蛋白與完全弗氏佐劑一起免疫BALBC小鼠后，能夠誘發(fā)高滴度的特異性IGG1106，并持續(xù)保持數(shù)月。不同劑量組進行比較，發(fā)現(xiàn)50ΜG的劑量能夠誘發(fā)理想的體液免疫反應(yīng)。另外，利用PCX免疫小鼠的特異性抗體滴度最高達1104，這一結(jié)果表明，與PCX抗原相比，串聯(lián)重復的PCX3抗原能夠誘發(fā)更強的免疫反應(yīng)?？筆CX3抗血清與多肽的反應(yīng)顯示位于核心蛋白的P1MTSTNPKPQRKTKRNTN以及NS3蛋白的P6TGDFDSVID這兩個B細胞表位與抗體反應(yīng)的滴度較高，提示二者在誘導HCV特異的體液免疫反應(yīng)中發(fā)揮主要作用。PCX3蛋白可誘發(fā)較高水平的特異性CTL效應(yīng)，特異性殺傷率為392﹪。在多肽表位中，NS5B的T細胞表位ELITSCSS的溶解率最高，提示該表位在誘發(fā)CTL殺傷效應(yīng)中具有重要的作用。流式細胞儀檢測外周血淋巴細胞表明，HCV多表位抗原PCX3免疫小鼠6周后，CD3CD4T細胞比例明顯升高，說明該蛋白可以有效刺激CD3CD4TH細胞增殖。針對免疫小鼠的安全性評價表明這一多表位抗原免疫是安全而有效的。利用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測PCX3抗血清體外與病毒粒子GENOTYPE2A的結(jié)合，實驗結(jié)果表明孵育過夜后，PCX3抗血清在體外能夠結(jié)合絕大部分的病毒粒子，初步顯示PCX3抗血清具有抗病毒感染的可能，為進一步抑制病毒感染的試驗提供基礎(chǔ)。本實驗中用于檢驗體液免疫被動保護反應(yīng)的模型是SCIDALBUPA轉(zhuǎn)基因小鼠。這種SCIDALBUPA純合的小鼠體內(nèi)進行人體肝細胞移植后，建立具有嵌合的人肝組織的轉(zhuǎn)基因小鼠。利用HCV陽性血清進行腹膜內(nèi)注射感染，病毒不僅能夠復制，而且產(chǎn)生了具有感染性的顆粒，可以作為HCV感染的小鼠模型。利用該模型的研究表明HCV陽性血清HCVGENOTYPE1A，30E6IUML與PCX3誘導的高滴度抗血清孵育過夜后進行感染，兩周后檢測發(fā)現(xiàn)實驗組中有兩只小鼠血清中含有低于500U的RNA拷貝數(shù)，其它三只血清中的RNA則為陰性，而對照組的7只小鼠全部感染了HCV，血清中的RNA拷貝數(shù)為30E03到35E06IUML。這一結(jié)果表明PCX3誘導的抗血清能使25的小鼠病毒滴度顯著減少，并且保護35的小鼠避免HCV感染，在被動免疫保護反應(yīng)方面發(fā)揮重要的作用。對PCX3抗血清進行分析，發(fā)現(xiàn)它能與HCV的核心蛋白、NS3蛋白特異性結(jié)合，驗證了抗血清中含有抗核心蛋白與NS3蛋白的抗體。利用PCX3抗原制備的單克隆抗體中篩選到兩株分別與HCV核心蛋白以及NS3蛋白結(jié)合，一株與包膜蛋白E1的表位多肽P5RMAWDMMMW反應(yīng)的單抗。表明PCX3誘導的體液免疫反應(yīng)中包含這三個蛋白的B細胞表位P1，P5和P6所引起的免疫反應(yīng)，且這些單抗可用于進一步研究抗體與病毒粒子的結(jié)合。在此基礎(chǔ)上，選取抗核心蛋白的雜交瘤細胞株進行抗體的基因克隆，以期獲得具有應(yīng)用價值的單鏈抗體，結(jié)果篩選到表達特定條帶的陽性克隆株，并經(jīng)過測序鑒定。為抗體的應(yīng)用研究奠定基礎(chǔ)。綜上所述，我們的結(jié)果表明，本研究所構(gòu)建的多表位抗原PCX3可以誘導小鼠產(chǎn)生特異性細胞和體液免疫應(yīng)答，產(chǎn)生的抗體不僅能在體外結(jié)合基因型2A的HCV病毒粒子，且更重要的是，在小鼠的感染模型中抑制了基因型1A的HCV感染，因此，這一抗原有望成為廣泛而有效的HCV疫苗候選者。

簡介：分類號密級UDC編號碩士學位論文血清血清IL6和IL10與腦梗死后認腦梗死后認知功能功能障礙關(guān)系的研究障礙關(guān)系的研究研究生姓名成明強指導老師姓名、職稱游詠教授學科、專業(yè)名稱內(nèi)科學神經(jīng)內(nèi)科專業(yè)研究方向腦血管病防治2012年5月目錄中英文縮略詞表1中文摘要2英文摘要4前言6研究對象與方法8結(jié)果13討論20結(jié)論24參考文獻25綜述30綜述參考文獻33攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文35致謝36

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簡介：返回抑制INHIBITIONOFRETURN，簡稱I是指對原先注意過的位置上物體作出反應(yīng)時所表現(xiàn)出來的反應(yīng)滯后現(xiàn)象。返回抑制有助于注意脫離先前的注意位置轉(zhuǎn)向新的空間位置，提高在視覺空間中注意的效率，反映了人類對復雜環(huán)境的進化適應(yīng)性。因此，考察返回抑制在視野范圍內(nèi)的空間分布對于了解返回抑制的進化適應(yīng)性具有重要意義。近來的研究發(fā)現(xiàn)，返回抑制在視覺空間中呈高斯分布，然而高斯分布并未將抑制擴散假設(shè)與注意動量假設(shè)區(qū)分開來。因此，本研究試圖通過操縱線索和靶刺激的空間關(guān)系，采用事件相關(guān)電位EVENTRELATEDPOTENTIALS，ERP技術(shù)探討返回抑制空間分布的腦內(nèi)時程動態(tài)變化，揭示返回抑制空間分布的規(guī)律。實驗一采用經(jīng)典的返回抑制實驗范式，中央注視點的周圍有四個靶刺激潛在位置，而且四個方框位置距離中央注視點的位置相等。線索與靶刺激之間的關(guān)系共有三種線索化位置，相鄰位置，相對位置。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，線索化條件下P1波幅減小，在175225MS內(nèi)，線索化與相鄰均比相對條件誘發(fā)了一個更大的負成分ND200，而且當返回抑制量大線索化位置時，ND200更大，ND270只住線索化條件下觀測到。結(jié)果顯示，ND200可能與返回抑制量大小相關(guān)。為了進一步驗證ND200與返回抑制的關(guān)系以及返回抑制空間分布的規(guī)律，實驗二采用四種線索條件線索、相鄰、短相對、長相對試圖將抑制擴散假設(shè)與注意動量假設(shè)分離。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，P1波幅住線索化條件下減小，ND200與返回抑制量相關(guān)，差異波線索減去短相對波幅大于差異波線索減去相鄰的波幅，且差異波線索減去短相對的ND200效應(yīng)大于差異波線索減去長相對的波幅，在275325MS內(nèi)，線索化比短相對誘發(fā)了一個更負的成分ND300，與實驗一結(jié)果類似，ND300效應(yīng)在差異波線索減去短相對條件下表現(xiàn)最明顯。結(jié)果表明1線索化條件下P1波幅減小表明靶刺激的早期感知覺加工在返回抑制產(chǎn)生起著重要作用，支持了注意抑制說。2ND200效應(yīng)與返回抑制量相關(guān)，ND200效應(yīng)可能表明了注意方向轉(zhuǎn)換時的認知沖突，注意方向轉(zhuǎn)變的越大，花費的認知資源越多，ND200效應(yīng)更大。3本研究結(jié)果不支持抑制擴散理論，返回抑制可能是由線索化位置的抑制和注意方向的轉(zhuǎn)換共同引起的。